细胞工程第7章干细胞.pptx

第 7 章干细胞(Stem Cell )什么是干细胞(stem cells)干细胞是具有自我更新(Self-renewal)和分化潜能(Potency)的细胞。Mouse embryonic stem cells with fluorescent marker.Human Embryonic Stem cell colony on mouse embryonic fibroblast feeder layer. 胚胎干细胞全能干细胞 多能干细胞 成体干细胞专能干细胞 干细胞的分类按来源分类按分化潜能分类 成体干细胞位于成体的组织和器官胚胎干细胞和成体干细胞的比较定义:是从早期胚胎内细胞团(或生殖脊)分离，并经体外抑制分化培养所获得的干细胞。特点：在特定条件下，成体干细胞或者产生新的干细胞，或者按一定的程序进行分化，形成新的功能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。 特点：具有很强的分化能力，可以无限增加，并且可以分化成全身２００多种细胞类型。总结：它能长成动物的任何组织和器官 美国威斯康辛大学（University of Wisconsin）科学家汤姆森（James A. Thomson）带领研究团队首次从人类胚胎组织中提取培养出胚胎干细胞（Embryonic Stem Cell，ES Cell）株，并且证实此株细胞具有全能干细胞特征，此项研究论文发表在1998年11月6日出版的顶级学术期刊Science上. 这篇论文标着着一个时代的到来，而汤姆森也被人称作干细胞研究之父。James A. Thomsonthomson@primate.wisc.edu 1999年12月，美国《科学》杂志公布了当年世界科学进展的评定结果，干细胞的研究成果列在举世瞩目耗资巨大的人类基因组工程之前，名列十大科学进展首位。 7.1 胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）四个基本问题:什么是ES细胞？（定义）如何分离培养ES细胞（建系）如何鉴定ES细胞？ES细胞有何应用价值？人早期胚胎发育 受精 卵裂 受精后72h 受精后5-7天精子+卵子 合子卵裂球 桑椹胚囊胚 滋养层?胎盘及胎儿附属结构囊胚 内胚层?消化道、呼吸道上皮和腺体；肝；胆；胰。 内细胞团 中胚层?结缔组织；血液；肌肉；骨骼；泌尿生殖系统 外胚层?体表结构；神经系统胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）胚胎生殖细胞（embryonic germ cells, EG细胞）7.1.1　胚胎干细胞的生物学特性参见 7.1.3 ES细胞的鉴定7.1.2 胚胎干细胞的建系建系步骤：获取早期发育胚胎分离囊胚的内细胞群ES细胞体外培养，细胞非分化增殖 ES细胞的鉴定ES的传代和冻存 7.1.3 胚胎干细胞的鉴定（1）细胞形态特征、取材部位（2）细胞表面的特殊标志（3）细胞内干细胞标志基因的表达（4）端粒酶（5）核型分析 体内分化（6）分化潜能 体外分化 嵌合体:利用ES细胞可以获得具有来自两个或多个合子体细胞的个体，又叫镶嵌体形态学鉴定：典型的ES细胞体积较小，有一个大核，核内有一个或多个明显的核仁，胞质较少。细胞之间界限不清晰，紧密聚集呈鸟巢状克隆。 胚胎干细胞的特性分化能力检测ES细胞具有发育全能性，这是其区别于其它细胞的显著特点。ES细胞一旦脱离饲养层或除去分化抑制物后进行培养，会自发分化为多种细胞。在某些物质的诱导下，一些特定基因的表达变化，从而使ES细胞发生定向分化。 分化能力检测①体外分化试验：将所培养的细胞制成悬液在铺有明胶的培养皿中培养，则贴壁生长的ES细胞会自发地分化为各种细胞，而悬浮生长的ES细胞会形成简单类胚体，然后进一步形成囊状胚体。②体内分化试验：将一定量培养的ES细胞注入同源动物的皮下，过一段时间后会形成组织瘤，且组织瘤内有三个胚层的细胞存在。③核移植检测：将培养的细胞作为核供体注入去核卵母细胞中，观察重构胚是否正常发育。④嵌合体形成检测：将培养的细胞与受体胚胎结合并移植入同期假孕受体，ES细胞可参与受体胚胎的发育从而得到嵌合体动物，然后通过毛色判断，或同工酶检测。 干细胞诱导分化的常用方法（1）加入诱导细胞分化的因子或化学物质， 如VGEF、bFGF 、DMSO和RA等（2）将ES细胞与特定的细胞共培养 （3）将某种分化诱导因子的基因转入ES细胞内 胚胎干细胞的体外定向诱导分化：　胎牛血清，骨髓基质细胞共培养胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?造血细胞　RA胚胎干细胞－－－－－－－－－－－－－－－?神经细胞　DMSO胚胎干