植物组织培养的基本原理.ppt

1 植物组织培养的基本原理; ★植物细胞全能性（Cellular totipotency）： 任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植珠所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 （Haberlandt, 1902）;1.1 植物组织培养的理论基础—细胞全能性; 细胞全能性（红罗卜）;1.2 植物细胞的分化与脱分化;;1.2 植物细胞的分化与脱分化;离体的植物器官、组织、细胞;1.3 植物的形态建成;1.3 植物的形态建成;外植体的成苗途径;主要内容:;;1.3.1愈伤组织的诱导与器官分化;自然条件下的植物???伤组织;1.3.1愈伤组织的诱导与器官分化;2、影响愈伤组织诱导的因素：;案例2. 不同培养基及激素浓度对诱导扁桃花药愈伤组织的影响 无论在MS还是在H或B5培养基中，不附加激素2, 4-D均不能诱导扁桃花药愈伤组织的形成， 扁桃花药在H+1.0mg/L 2,4-D的培养基上诱导率最高为47%;在MS+1.0mg/L 2,4-D培养基上诱导率为67.0%;在B5+0.5～1.0mg/L2,4-D，出愈率都在84.0%以上，其中以2,4-D为0.5mg/L时，出愈率高达100%.。说明在扁桃花药诱导过程中，最适基本培养基是B5，最佳 2,4-D浓度为0.5mg/L。;研究表明：;2）.培养基;二、愈伤组织的形成; （1）诱导期（起动期、或起始期）: ;;;特点：;诱导期的长短;改变诱导期长短;（2）分裂期：;分裂期特征：; 分裂期愈伤组织;（3）形成期（形成期）：;形成期愈伤组织的特点：;提醒：;愈伤组织的类型：;根尖愈伤组织 （无色透明）;;影响植物愈伤组织形成的因素：;影响植物愈伤组织形成的因素：;基本培养基对当归愈伤组织继代的影响* ;不同激素组合对当归愈伤组织增殖的影响*;1.3.1.2 愈伤组织的形态发生 ; 一）、 愈伤组织形成 1 、器官的形成 一般愈伤组织开始分化时，由大小不等的细胞开始逐渐形成大小均匀的细胞，保持相对稳定状态。 在分化时，愈伤组织的表层和内部都可形成分生中心。芽多发生在愈伤组织的表层，属外起源。;;二）、激素对愈伤组织分化的影响;愈伤分化;器官分化的植物激素控制理论;外植体;植物物种和品种基因型影响愈伤组织的分化;不同基因型、激素浓度对大豆植株再生的影响;木本植物愈伤组织形态发生的人为调控;芦荟愈伤组织形态发生的人为调控;芦荟愈伤组织形态发生的人为调控;影响愈伤组织分化的其他因素;影响愈伤组织分化的其他因素; 四 、 愈伤组织的培养 一）、培养基 培养基一般包括大量元素、微量元素和一种碳水化合物，最常用的碳水化合物是蔗糖。 这样简单的培养基(基本培养基)只有很少几种植物组织能够培养和维持下去，大多数组织需要添加各种各样的附加物（完全培养基），如维生素、氨基酸、糖醇，生长素、细胞分裂素、赤霉素、螯合剂如EDTA、各种营养性的提取物如椰子汁等。;注意： 选用完全已知的合成化合物，不大主张用复杂的天然产物，如酵母提取物、番茄汁、椰子汁等。 必须强调： 适合于诱发愈伤组织的培养基不一定适合于维持这些愈伤组织；适合于液体培养的培养基也不一定适合于固体培养。 ; 培养基中的N，大多数都用硝态氮，只有MS培养基和B5培养基中才用硝态和铵态的混合物。 K的水平在近代的培养基中有逐渐提高的趋势。 实验表明：各种离子浓度大为不同的培养基往往能使相同的组织快速生长。 例如Hildebrandt培养基与MS培养基显著不同，但二者都能培养烟草的愈伤组织。;注意： 1）、激素的种类和用量的添加;二）、愈伤的培养方式： 1、按培养基的物理状态，愈伤组织培 养分为固体和液体培养两大类。 液体培养又分静止和振荡培养的二类。 ;继代培养（传代）：愈伤组织在培养基上生长一段时间后，由于养分的枯竭，水分的散失，组织代谢产物的积累，影响愈伤组织生长，因此必须将组织转移到新的培养基上。 一般在25-28℃下进行固体培养时，每隔4-5周进行一次继代培养。 ; 组织块较小时，继代培养时可将整块组织转移。组织块较大时，可先将组织分成几小块再接种。继代培养必须及时进行，长期不传代常常由于代谢产物的累积，对组织起毒害作用，某些植物愈伤组织的褐化现象即往往由此引起的。褐化的愈伤组织反复地进行继代培养，可使愈伤组织恢复活力而迅速生长; 理论上愈伤组织是可以无限制继代，但愈伤组织继代次数增加，形态发生能力逐渐丧失。 原因：遗传因素即继