细胞生物学技术2013免疫化学.pptxVIP

第二部分 细胞化学技术 cytochemistry ;什么是细胞化学？;什么是细胞化学？;细胞化学技术 在保持细胞结构完整的条件下，借助细胞中的化学反应在原位确定化学成分的分布及这些成分的分布在细胞活动中的动态变化的技术，用以阐明细胞化学成分、结构和功能的关系。 包括酶细胞化学技术、免疫细胞化学技术、放射自显影技术和原位杂交等。;1.保持细胞、组织的固有形态和结构； 2.防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质； 3.细胞内蛋白质???固; 4.保持组织或细胞化学成分的某些属性,如抗原性或核酸杂交活性。;特点2.细胞化学反应及可见性; 细胞化学技术主要包括： ;定性、定位分析;石蜡包埋或冷冻;3.技术的灵敏度和特异性、问题的解决（trouble shooting);第六章 免疫细胞化学技术;1.组织细胞中的特异分子均可作为抗原,因而该技术可用来检测几乎所有大分子的定位。;; 凡能刺激机体产生抗体并能与 抗体特异结合的物质称为抗原。; 酶、 受体、 抗体、 细胞外基质 激素、 细胞结构蛋白、病原体等 它们都可以用免疫细胞化学技术来检测; 二、抗体;Fc片段可被抗种属抗体结合， 如:来源于兔的抗体，可被抗兔抗体识别和结合； 亦即：“一抗、二抗” 一抗，抗**蛋白的特异抗体，来源于兔 二抗，抗兔抗体 一抗结合**蛋白，二抗可被一抗结合;; 2类抗体 多克隆抗体— 抗血清，是用提纯的抗原免疫动物后从动 物血清制备得到的。 特点：可自行制备；灵敏度高；特异性？ 单克隆抗体— 由单个产生特异抗体的Ｂ淋巴细胞扩增 的细胞克隆产生的抗体。 特点：特异性高 兼顾灵敏度，特异性 ;;免疫反应的特异性表现在： 抗原作为一类结构复杂的大分子能刺激机体 产生对其特异的抗体并与抗体发生反应 抗体针对某种抗原分子而产生，特异地识 别该抗原并与其结合 ; 把组织细胞中的特异分子作为抗原, 用在显微镜下可见的标记物标记特异抗体 (或者标记抗原抗体复合物)结合，使免疫化学反应具有可见性, 间接地显示抗原,达到在细胞或细胞器水平定位特异分子的目的。;组织抗原;;直接法与间接法;五、标记物及其在光镜和电镜下的 可见性 ;; 免疫荧光技术将 荧光素作为标记物 使组织细胞中形成的抗原抗体复合物在荧光显微镜下可见，从而显示抗原物质的定位 ; 荧光素： 在激发光（荧光显微镜提供）的照射下，能发出较激发光波长更长的可见光（发射光），在显微镜下可见，并随照射停止而消失。 荧光显微镜： 荧光显微镜的光源提供各种激发光，使受检标本内的荧光物质发出发射光. （应用荧光染料时都需要知道2个波长： excitation wave length, emission wave length); 如:１.异硫氰酸荧光素( FITC) ex:490nm, es:520-530 绿色 ２.四乙基罗达明 ex:570nm, es:595nm 明亮的橙色 ３.四甲基异硫氰酸罗达明 ex:550nm, es:620nm 橙红色 ４.藻红蛋白(PE) 多种，橙黄-红色 ;海马细胞 微管蛋白 绿色(胞体、树突) 轴突终末蛋白 红色(突触) 黄色？ ;补充:;subcellular localization;