全基因组甲基化测序研究解决方案.pdfVIP

技术服务 ： / Tel ： / Web ： 上海市张江高科技园区李冰路151 号（201203 ） 全基因组甲基化测序 背景介绍 全基因组甲基化测序结合了亚硫酸氢盐转化（bisulfite conversion ）方法与新一代高通量 测序技术，可在单碱基分辨率水平上高效地检测全基因组DNA 甲基化状态。亚硫酸氢盐处 理可以使DNA 中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变， PCR 扩增所需片段，则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。对 PCR 产物进行高通量测序，与参考 序列比对，即可判断CpG/CHG/CHH 位点是否发生甲基化。 实验路线 基因组DNA DN 段化 末端修复、加A 连接接头 Bisulfite 处理 上机测序 PCR 扩增 技术路线 伯豪生物 1 / 5 技术服务 ： / Tel ： / Web ： 上海市张江高科技园区李冰路151 号（201203 ） 样品需求（基因组DNA ） 样品纯度：OD 260/280值 1.8～2.0 之间； RNA 应去除干净； 样品浓度：最低浓度不低于50ng/µl； 样品总量：每个样品总量不少于6µg； 样品溶剂：应溶解在H 0或TE (pH 8.0) 中； 2 样品运输：DNA低温运输（-20 ℃）；在运输过程中用parafilm将管口密封好，以防出现污染。 案例解析 人类早期胚胎DNA 甲基化图谱 在哺乳动物胚胎的早期发育中，甲基化是表观调节的重要内容。但是，在人类全基因组 范围内，胚胎的早期甲基化动态调节模式由于技术的困难和材料的缺乏并没有充分的研究分 析。本研究中，通过全基因组的亚硫酸氢盐测序技术，系统的描绘了从受精卵到胚胎植入后 甲基化的变化。研究发现，在2细胞时期全基因组发生了去甲基化波动。这与之前在小鼠中 的研究结果相反。而且，来自父本 上的基因去甲基化显著快于母本，到受精卵时期结 束的时候父本的前核甲基化状态已经低于母本的前核。在早期胚胎发育的过程中，启动子区 甲基化与基因表达的负相关性逐渐加强，在胚胎移植后到达峰值。此外，本研究还指出活跃 伯豪生物 的基因在胚胎移植前的整个过程都没有被甲基化。早期胚胎往往保持更高的甲基化残留，在 转座子进化上更活跃。这些研究对于研究人类早期胚胎的甲基化提供了新的视角。 2 / 5 技术服务 ： / Tel ： / Web ： 上海市张江高科技园区李冰路151 号（201203 ） 在人类胚胎早期发育中DNA 甲基化的动态变化 伯豪生物 原文出处：Guo H, Zhu P, Yan L, et al. The DNA methylation landscape of human early embryos. Nature.2014.