包涵体的纯化和复性情况总结.pdfVIP

板块一、大肠杆菌 （这里讨论的大肠杆菌为非分泌到培养基中的重组蛋白，是否有重组蛋白分 泌到培养基中的工程菌我没有见过。） 一、关于菌体的量 大肠杆菌表达的基因工程蛋白是纯化人员最方便获得的原料，对纯化工艺开 发来说几乎没有原料方面的限制。常看到有战友用个几毫升的菌液去做纯化， 对此我十分不解，同样要做，为什么不多做点呢？很少的菌体会给纯化带来 一些难以估计的问题，工艺的重复性和放大往往出现问题。因此，要做个好 工艺就多发酵表达一些菌体吧。我做纯化时，初始工艺摸索用的菌体量一般 为 10g 左右。 二、关于是否包涵体表达 包涵体的定义我就不讲了。我要讲的是，一个基因工程蛋白是否是包涵体表 达的说法本身就不完全准确。至于包涵体在电镜下的晶体颗粒表现等等对我 们纯化来说毫无意义，我相信做纯化工艺的人没有谁去看这个电镜，也不关 心。我们判断的依据只是 SDS，目的蛋白在破菌沉淀中， 我们就认为是 包涵体表达，但这是一个似是而非的结论。看着没问题，实际上是有毛病的。 关键在于你用的是什么破菌缓冲液！有些蛋白在用缓冲液 A 破菌时是在破菌 沉淀中，而用缓冲液 B 破菌时却在破菌上清中。缓冲液 A 和