白细胞介素完整.ppt

大肠杆菌转化法- CaCl2法 感受态细胞制备： 将培养液转入离心管中，冰上放置10 分钟，然后于4℃下离心10 分钟。 弃去上清，用预冷的0.05mol/L 的CaCl2 溶液10ml 轻轻悬浮细胞，冰上放置15-30 分钟后，4℃下，离心10 分钟。 加入连接反应产物：混匀，置冰上30分钟。 热击：42℃，90s； 置冰上，1－2分钟。 扩增培养：加入LB培养基，37℃，45分钟。 涂平板：含有抗生素的LB固体培养基上。 筛选培养：37℃，出现菌落。 * 5.筛选与鉴定 转化后的细胞类型 非转化子：没有导入外源DNA的非转化宿主细胞 转化子：导入外源DNA的转化细胞 非重组子：仅含有空载体分子的转化子 重组子：含有重组DNA分子的转化子 目标重组子：含有连接正确的重组分子（目的） 非目标重组子：不含目的基因重组子 * 筛选方法 抗生素筛选法： 抗生素的抗性基因| 氨苄青霉素 * 筛选方法 篮白斑筛选法： lacZ基因，重组子白色，非重组子蓝色。 培养基中含X-gal X-gal: 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷 β -半乳糖苷酶可以把培养基中无色的X-gal分解成半乳糖和呈蓝色的5-溴-4-氯-靛蓝，使菌落成蓝色 * 鉴定方法 菌落PCR：含有目标基因 载体大小：电泳检测 酶切鉴定：目标基因插入及插入方向 测序确证：目标基因的序列准确无误 * 工程菌构建的质量控制 为了确保工程菌构建的有效性，必须遵循GMP及其有关生物制品研究技术指导原则，做好菌种的纪录和管理。 * 温度对工程菌产物合成的影响 生长与生产温度不一致 较高温度表达量达，易形成包涵体 策略：较低温度下有利于表达可溶性蛋白质 对于热敏感的蛋白质，高温会降解破坏 策略：生产期可采用先高温，后低温，变温表达，避免蛋白质降解 例如： 大肠杆菌和酵母生长最低温度为10℃ 大肠杆菌生长最适温度为37℃，最高温度为45℃ 酿酒酵母：生长最适温度为30℃，最高温度为40℃ * 白细胞介素2的应用列举 1.肿瘤 2.AIDS（艾滋病） 3.抗病毒，细菌感染 4，自身免疫系统疾病 * 参考文献： 基因工程制药-百度文库 白细胞介素-百度百科 各种白介素的作用-免疫学技术-生物帮 第二节-白细胞介素??．医源世界 白细胞介素2-百度百科 3.??欣吉尔??．常用药品说明 IL-2-豆丁网 *