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植物组织培养试验 植物组织培养试验 PAGE PAGE / NUMPAGESPAGE31 植物组织培养试验 PAGE 《植物组织培育技术》实验指导 实验一 组培室设施观光及器皿的清洗和灭菌 一、目的要求： 1．经过观光，认识组织培育室的几个主要构成部分和各部分应有的 基本设施以及相关仪器的用途与功能。 2．经过实质操作，学会清洗剂的配制和各样器皿的冲洗和灭菌方法。 二、资料器具： 高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。 三、说明： 在进行各种详细的组培实验前，第一认识组培室的构造及主要设施的用途和性能是十分必需的，整体上的认识有益于此后各实验的进行以及正确的使用各样仪器和设施。 植物组织培育是一项十分仔细的工作，为了保证植物外植体不受污 染，第一关就是要对各样器皿进行冲洗和消毒， 使它们保持无菌状态， 做这些工作相同有一套科学的方法和需要娴熟的技巧，所以每个学生一定学好这套基本功。 四、方法和步骤： 第一在老师率领下观光组培室，并听取解说，而后配制洗液，称 取工业用重铬酸钾 40克，溶解在500ml在水中，而后渐渐加入450ml 粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化 剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、白腊等则用此液 无效，铬酸洗液可频频使用，直到溶液呈青褐色为止。此溶液腐化性 强，清洗时需注意。 每人冲洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净→泡入洗衣粉水溶液中进行洗漱→清水频频冲刷→蒸馏水淋一遍→烘干备用。 而后冲洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采纳先碱后酸，即用洗衣粉洗漱后冲刷洁净→晾干→侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水频频冲刷洁净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。 带有白腊或胶布的器皿：先将其除掉，再用惯例清洗，白腊用水煮沸 数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲刷，凉干后浸入洗液，此后的步骤同前。 对器皿和器具进行高压灭菌， 即用手提式高压灭菌锅，在个大气 压下保持15~20分钟。解剖刀、手术剪、解剖针、镊子等器具 在接 种前还要用百分之七十的酒精棉球擦一下，再用酒精灯的火焰灭菌，冷却后即可应用。 五、作业：试论述为何要对器皿和器具进行严格的清洗和灭菌？ 实验二 母液的制备及培育基的配制、灭菌 一、目的要求： 经过掌握培育基对母液制备及常用培育基的配制和灭菌方法，为植物组织培育准备适合的营养条件。 二、资料器具： 高压灭菌锅、冰箱、一般及精细天平、电炉、铝锅、玻璃器皿（烧杯、量微、容量瓶、移液管、试剂瓶、三角瓶、漏斗），化学试剂(CaCl2·2H2O，KNO3，MgSO4·7H2O， NH4NO3，KH2PO4，Na2—EDTA，FeSO4·7H2O，MgSO4·4H2O，ZnSO4·7H2O， H3BO3，KI，NaMoO4·2HO，CuSO4·5H2O，CoCl2·6H2O，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，肌醇，蔗糖，琼脂，若干种生长调理物质及天然复合物，HCL,NaOH,酒精)，以及称量纸、药匙、玻璃棒、精细度纸，瓶盖用纸，线绳或橡皮筋、铅笔、标签纸。 三、说明： 植物资料培育要获取成功，并正常生长，培育基的构成成分是一个决定性要素，不一样植物要求不一样的培育基，所以，在进行大批工作以前，对不一样培育基应进行剖析、比较、试验，选择或发展出一个切合试验资料需要的适合培育基。 大部分植物组织培育所用的培育基由无机营养物、碳源、维生素、生长调理物质和有机附带物等。 四、方法和步骤： （一） 母液的制备 母液的配制是按所使用药品的类型，而分别配成大批元素、微量元素、维生素和铁盐等。配制母液时特别要注意无机盐成分在一同， 可能产生的化学反响，如 2+2-2+2+3- 一同溶解后，会 Ca和SO,Ca,Mg和PO 4 4 产生硫酸钙或磷酸钙的不溶物积淀，所以不可以配在一同作母液储存，应分别配制和保留。 配制母液时要用两重蒸馏水等纯度较高的水，药品应采纳化学纯或剖析纯级，药品的称量及定容都要正确，各样药品先以少量蒸馏水使其充足溶解，而后按培育基上的摆列次序混淆。 现以Murashige和Skoog(1962)培育基为例表达以下：依据各样药品的特色，母液可配成4种。 表1 MS培育基母液的配制 成分 规定用量 贮备液扩 称取量 母液定 配1LMS培 -1 大倍数 /mg 溶体积 养基汲取量 /ml /ml 母液Ⅰ 大批元素 KNO3 1900 20 38000 NH4NO3 1650 20 33000 MgSO4·7H2O 370 20 7400 1000 50 KHPO