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2021-11-23 发布于江苏
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高效液相分析方法开发.ppt

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高效液相分析方法开发;HPLC方法建立前准备工作;目录;一.色谱柱选择;（1）API分析方法开发, 需要做色谱柱筛选试验, 最少使用三种不一样类型色谱柱, 每种类型三只, 要求来自不一样厂家（Waters, Agilent, Phenomenex…)。（2）制剂分析方法选择色谱柱与API相同, 但筛选试验较简单, 通常依据样品性质直接选择一两只一般C18或者其她色谱柱进行比较。;我们现有色谱柱: （1）用于胶原蛋白大分子含量测定: Symmetry C18 5.0μm 4.6mm*250mm 100A （Waters）（2）用于氨基酸分析: AccQ Tag For Hydrolysate Amino Acid Analysis 3.9mm*150mm （Waters）（3）用于外部校正: Supersil ODS2 5.0μm 4.6mm*250mm （依利特）（4）新柱子: Symmetry300 C18 5.0μm 4.6mm*250mm （Waters）;二.检测波长选择;三.流动相选择;流动相优化: ;单独使用酸不行就要考虑使用缓冲盐, 选择标准: 简单、稳定、缓冲能力强, 需要调PH值时要有对应酸或碱。常见缓冲盐: 磷酸盐、钾盐、钠盐、醋酸盐, 盐浓度在10-20mM左右。使用缓冲盐时要注意流动相混合后盐可能析出问题和盐背景吸收造成基线漂移严重问题。;流动相调整小秘诀;四.梯度优化;例: 氨基酸分析流动相A: 醋酸盐-磷酸盐缓冲液流动相B: 色谱乙腈流动相C: 纯化水 ;分离度: 0.823;分离度: 1.50;五.其她