MMFSCNG饲料中维生素E的测定.pdf

MMFSCNG0235饲料 维生素 E 高效液相色谱法 MM_FS_CNG_0235 饲料中维生素 E 的测定 1 适用范围 本方法适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料、维生素预混料中维生素 E 的测定。检测范围为每千克样品中含维生素 E 的量在(dl- α- 生育酚 1mg)以上。 2. 原理概要 用碱溶液皂化试验样品，去除脂肪，使试样中天然生育酚释放出来并水解， 添加的生育酚乙酸酯为游离的生育酚。 乙醚提取未皂化的物质， 蒸发乙醚， 用正 己烷溶解残渣。 提取物注入高效液相色谱柱， 用紫外检测器在 280nm处测定， 外 标法计算维生素 E(dl- α- 生育酚 ) 含量。 3. 主要试剂和仪器 主要试剂 无水乙醚：无过氧化物 过氧化物检查方法： 用 5mL乙醚加 1mL10％碘化钾溶液， 振摇 1min，如有过 氧化物则放出游离碘，水层呈黄色，或加％淀粉指示液，水层呈蓝色。该乙醚需 处理后使用。 去除过氧化物的方法： 乙醚用 5 ％硫代硫酸钠溶液振摇， 静置，分取乙醚层， 再用蒸馏水振摇，洗涤两次，重蒸，弃去首尾 5％部分，收集馏出的乙醚，再检 查过氧化物，应符合规定。 乙醇；正己烷：重蒸馏 ( 或光谱纯 ) ； 1,4- 二氧六环；甲醇：优级纯； 2,6- 二叔丁基对甲酚 (BHT)；无水硫酸钠；氢氧化钾溶液： 500g/L 。 抗坏血酸乙醇溶液 5g/L ：取抗坏血酸结晶纯品溶解于 4mL温热的蒸馏水中， 用乙醇稀释至 100mL，临用前配制。 维生素 E(dl- α- 生育酚 ) 标准溶液 dl- α- 生育酚标准贮备液：准确称取 dl- α- 生育酚纯品油剂 (USP)于 100mL 棕色容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，混匀， 4℃保存。该贮备液浓度每 毫升含维生素。 dl- α- 生育酚标准工作液： 准确吸取 dl- α- 生育酚贮备液， 用正已烷按 1 ∶ 20 比例稀释。若用反相色谱测定，将 ,dl- α- 生育酚标准贮备液置入 10mL棕色 小容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇稀释至刻度，混匀，再按比例稀释。配制工作 液浓度为每毫升含维生素 E 50 μg 。 酚酞指示剂乙醇溶液（ 10g/L ）。 氮气 ( 纯度％ ) 。 . 仪器 实验室常用设备。 圆底烧瓶，带回流冷凝器。 恒温水浴或电热套。 旋转蒸发器。 超纯水器 ( 或全磨口玻璃蒸馏器 ) 。 高效液相色谱仪，带紫外检测器。 4. 试样的制备 选取具有代表性的饲料样品至少 500g，四分法缩减至 100g，磨碎，全部通 过孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。 5. 过程简述 试验溶液的制备 皂化 称取试样配合饲料或浓缩饲料 10g，精确至，维生素预混料或复合预混料 1～ 5g，精确至。置入 250mL圆底烧瓶中，加 50mL抗坏血酸乙醇溶液，使试样完全 分散、浸湿，置于水浴上加热，混合直到沸点，用氮气吹洗稍冷却，加 10mL氢 氧化钾溶液，混合均匀，在氮气流下沸腾皂化回流 30 min ，不时振荡防止试样 粘附在瓶壁上，皂化结束，分别用 5mL 乙醇、 5mL水自冷凝管顶端冲洗其内部， 取出烧瓶冷却至约