氨基酸和蛋白质代谢试验 .docxVIP

PAGE PAGE 1 氨基酸和蛋白质代谢试验 1. （靛基质）实验 (1)原理：某些细菌具有色，能分解培养基中的色氨酸产生吲哚，吲哚与试剂（）作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。(2)办法：将待检细菌接种于蛋白胨水培养基中，35℃孵育1～2天，沿管壁渐渐加入试剂0.5 mL，即可观看结果。(3)结果推断：两液面交界处呈红色反应者为阳性，无色为阴性。（4）注重事项：蛋白陈中应含有丰盛的色氨酸，否则不能应用。2．尿素实验(1)原理：某些细菌能产生N酶，分解尿素形成氨，使培养基变为碱性，酚红指示剂变为红色。(2)办法：将待检细菌接种于尿素培养基中，35℃孵育1～4天。(3）结果推断：呈红色者为尿素实验阳性。(4）注重事项：尿素培养基色彩的变幻是依赖浮现碱性来实现的，故对尿素不是特异的。某些细菌如铜绿假单胞菌利用培养基中的蛋白胨可分解为大量氨基酸，使pH值上升而呈碱性，造成假阳性。因此，必需用无尿素的相同培养基作为对比。3.氨基酸脱羧酶实验(1)原理：有些细菌能产生某种氨基酸脱羧酶，使该种氨基酸脱去羧基，产生胺（如赖氨酸→尸胺、→腐胺、→精胺），从而使培养基变为碱性的，使指示剂变色。(2)办法：挑取纯菌落接种于含有及不含氨基酸的对比培养基中，加无菌石蜡油笼罩，35℃孵育4天，每日观看结果。(3)结果推断：若仅发酵显黄色，为阴性；由黄色变为紫色，为阳性。对比管（不含氨基酸）为黄色。(4)注重事项：①因为脱羧酶培养基含有蛋白胨，培养基表面的蛋白胨氧化和脱氨基作用可产生碱性反应，所以培养基应封闭，隔绝空气，以消退假阳性反应；②不含氨基酸的空白对比管，孵育18～24 h后，仍应保持黄色（发酵葡萄糖）。4．苯丙氨酸脱氨酶实验(1)原理：有些细菌产生，使脱去氨基产生苯丙酮酸，与作用形成绿色化合物。(2)办法：将待检细菌接种于苯丙氨酸凉脂斜面上，3 5℃孵育18～24 h，在生长的菌苔上滴加试剂，立刻观看结果。(3)结果推断：斜面呈绿色为阳性。(4)注重事项：①注重接种菌量要多，否则会浮现假阴性反应；②实验在加入试剂后，应立刻观看结果，由于绿色会很快褪去，不管阳性或阴性结果，都必需在5 min内做出推断。5．硫化氢实验(1)原理：细菌分解培养基中的含硫氨基酸（如、等）产生，碰到铅或铁离子产生黑色硫化物。(2)办法：将培养物接种于培养基或克氏铁琼脂培养基中，35℃孵育1～2天，观看结果。(3)结果推断：呈黑色者为阳性。6．精氨酸双水解（ADH）实验(1)原理：精氨酸经两次水解后产生鸟氨酸、氨及，又在脱羧酶的作用下生成腐胺，氨与腐胺均为碱性物质，可使培养基指示剂变色。(2)办法：将待检菌接种于精氨酸双水解培养基上，35℃孵育1～4天，观看结果。(3)结果推断：溴甲酚紫指示剂呈紫色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性，呈黄色为阴性。(4)应用：主要用于肠杆菌科细菌及假单胞菌属某些细菌的鉴定。