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肌苷对海人藻酸引起纹状体损伤的保护作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：肌苷对海人藻酸引起纹状体损伤的保护作用 1 1材料和方法 2 文2：肌苷对海人藻酸引起纹状体损伤的保护作用 6 参考文摘引言： 7 原创性声明（模板） 8 文章致谢（模板） 9 正文 肌苷对海人藻酸引起纹状体损伤的保护作用 文1：肌苷对海人藻酸引起纹状体损伤的保护作用 0引言 肌苷在临床上被广泛地应用于各个领域，传统观点认为在中枢神经系统，肌苷是一种无活性的代谢中间产物，但是最近研究表明肌苷在体外可保护神经元免于损伤. 史明等［1］发现，在用ZO4损伤PC12（一种常用的神经元模型）后，单纯给予肌苷即可提高PC12细胞的存活. 由于兴奋性毒素的损伤是各种神经退行性疾患的一个重要的共同机制，因此，我们使用兴奋性毒素海人藻酸（KA）损伤纹状体模型［2］，探讨肌苷是否在体对兴奋性毒性引起的神经细胞损伤具有保护作用. 1材料和方法 材料成年SD雄性大鼠10只(第四军医大学实验动物中心提供)，体质量250~300 g. 利用日本Narishiga公司立体定向仪制作纹状体内注射KA模型. 10只大鼠分成两组(n=5)，分别于术前1 d给予肌苷（50 g#12539;L-1, 75 mg#12539;Kg-1）或等量生理盐水腹腔注射，每日3次. 持续给药至术后第3日结束. 方法 纹状体内注射KA模型动物用10 g#12539;L-1戊巴比妥钠50 mg#12539;Kg-1，腹腔注射麻醉后，置于脑立体定位以上，常规皮肤消毒，正中矢状切开头皮，颅骨钻孔，依图谱在尾壳核前部（AP， ~ mm； LP， mm；V， mm） 5 min内用微量进样器徐缓注入 g#12539;L-1的KA或生理盐水 μL，并留针5 min后缓慢退出. 组织处理手术后，大鼠存活3 d，将动物麻醉，经左心灌注生理盐水100 mL，然后灌注 mol#12539;L-1 PBS配置的40 g#12539;L-1多聚甲醛350 mL. h后取脑，并后固定3 h，再放入200 g#12539;L-1蔗糖平衡溶液中，置于4℃冰箱中过夜. 组织沉底后，于恒冷箱内切片，片厚40 μm，分为5套. 组化染色和计数从5套切片中随即取出两套，分别作Nissl染色和NADPH脱氢酶(NADPHd)组化染色. NADPHd组化染色是将切片洗涤3次后，放入含NADPHd g#12539;L-1,硝基四氮唑蓝（NBT）100 mg#12539;L-1和3 g#12539;L-1 Triton X100的10 mmol#12539;L-1的PBS(PH＝)溶液中孵育1 h，染好后用10 mmol#12539;L-1的PBS中止反应［3］. Nissl染色中的5个等距切片（200 μm）被用来衡量KA的损伤面积，其中两个位于针道平面以前，两个位于之后，一个恰好位于针道平面. 在BX60显微镜2倍目镜下采图，并于软件对其损伤区域进行描摹及 计算 . 同样，NADPHd组化染色中的5个等距切片（200 μm）被用来衡量肌苷对纹状体NADPHd阳性细胞数目的影响，我们使用损伤侧占对照侧纹状体NADPHd阳性细胞数目的百分数比作为衡量存活的指标. 被检平面按照其距针道平面的距离依次为-400，-200, 0, 200, 400 μm （Tab 1） 统计学处理： 使用SPSS软件进行student t检验. 对于因方差不齐不能采用student t的数据，使用 Wilcoxon(秩和检验)统计方法对其进行分析. 2结果 尼氏染色手术后3 d，KA损伤侧纹状体明显萎缩，侧脑室扩大. 损伤区较周围组织颜色浅淡，并与周围正常脑组织之间有一明显的分界线，易于区分. 且在损伤中央切片上占据了大部分纹状体，但皮质未被累及（Fig 1A）. 该区内大细胞神经元数目明显减少，但是胶质细胞增生明显. 肌苷组与生理盐水组相比，损伤区域更小一些（Fig 1B）. 定量分析证实肌苷组与生理盐水组比较，在被检的5个层面，损伤面积均有不同程度的减小（Tab 1） 组化染色KA损伤后，纹状体中心NADPHd神经元完全消失, NADPHd阳性神经纤维密度显著减低. NADPHd阳性神经元的减少和NADPHd阳性纤维密度减低，从损伤区中心至边缘呈渐变趋势. 损伤区周缘残存的NADPHd阳性神经元, 形态较单一, 梭形者居多, 胞体较小, 神经纤维不连贯，断断续续，突起较少而短，NADPHd阳性纤维密度也较低. 肌苷组与对照组相比，损伤区形态未见区别，但损伤区周缘残存细胞比例更高一些（Fig 2），在所检验的5个平面，残存细胞与对侧细胞数目的比值均有不同程度的提高（Tab 1） 图