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硫酸镍致雌性小鼠卵巢损伤作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：硫酸镍致雌性小鼠卵巢损伤作用 1 1 材料与方法 2 2 结果 3 24 腹腔注射硫酸镍对小鼠卵巢细胞周期的影响(表2) 4 3 讨论 4 文2：芹菜对雌性小鼠动情周期的影响 5 1 材料与方法 6 2 实验结果 7 2．1 芹菜对雌性小鼠动情周期的影响 见表1。 7 2．2 芹菜对小鼠动情周期各时相的影响：见表2。 7 2．3 芹菜对小鼠血红蛋白的影响：见表3。 7 3 讨论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 硫酸镍致雌性小鼠卵巢损伤作用 文1：硫酸镍致雌性小鼠卵巢损伤作用 镍(Ni)是人类条件必需的微量元素和常见 工业 及环境污染物之一，其毒性可累及肝、肾、肺和心血管等系统，对机体的许多酶系统也有一定毒害作用〔1〕。国际癌症研究机构(IARC)将镍及其化合物列为第一类致癌物。以往研究证实，镍化合物对雌雄两性的生殖功能均有不良影响，有关镍干扰小鼠动情周期，诱发卵巢细胞凋亡，引起卵巢早衰的机制未见报道。本研究以卵巢贴片细胞形态学变化结合流式细胞仪分析细胞周期，探讨镍诱导小鼠卵巢细胞凋亡的毒作用及其机制，为研究镍生殖毒性机制及其防治提供实验依据。 1 材料与方法 11 实验动物 健康雌性昆明种小白鼠48只(兰州大学实验动物中心) 12 试剂与仪器 硫酸镍(NiSO4)，AR(西安化学试剂厂)；4%美蓝；吉姆萨染液；75%乙醇；磷酸缓冲液(PBS)；碘化丙啶(PI)；美国COULTER EPICSRXI型流式细胞仪；802离心沉淀器(上海手术器械厂)；OLYMPUS光学显微镜，设备号051750。 13 实验方法 动物入室适应环境3d，按体重分层随机分为4组，12只/组。腹腔注射1次/d，连续12d。NiSO4染毒剂量的选择依据小鼠NiSO4腹腔注射染毒半数致死量(LD50)(40mg/kg)的1/4，1/8，1/16进行，以NiSO4计分别为100，50，25mg/kg，对照组以生理盐水02ml/(10g·bw)腹腔注射。阴道涂片美蓝染色后镜下观察细胞形态。染毒结束后摘取卵巢待检。细胞贴片吉姆萨染色油镜下观察细胞形态并进行统计分析；其中凋亡指数〔2〕=(100个细胞中凋亡细胞数目/100)×100。流式细胞仪检测结果用Muticycle软件分析亚二倍体峰及细胞周期，得出各细胞周期百分率，并按以下公式 计算 增殖指数(PI)〔3〕：PI=S+G2/MG0/G1+S+G2/M×100% 14 统计分析 采用SPSS 115统计软件进行处理。流式细胞术检测结果以Muticycle软件分析，统计细胞周期不同时相细胞比例及凋亡率。 2 结果 21 一般状况 染毒早期动物出现轻微兴奋表现，于染毒后期表现为不同程度精神萎靡、活动减少、拥挤蹲伏、毛发蓬松等。 22 NiSO4对雌性小鼠动情周期的影响(图1～4) 实验结果显示，对照组小鼠动情周期较 规律 ，各染毒组小鼠表现为非动情期延长，主要是动情前期延长且不规则，光镜下可见有大量上皮细胞，呈粒状胞浆，尚有少量角化上皮细胞，但无白细胞，尤以高剂量组更为显著。可见染毒组小鼠在染毒期间动情周期受到抑制。 图1 动情前期（略） 图2 动情期（略） 图3 动情后期（略） 图4 动情间期（略） 23 NiSO4导致小鼠卵巢细胞凋亡的形态学变化(表1) 表1数据表明，低剂量组小鼠卵巢细胞的凋亡情况与对照组比较，差异无统计学意义(P005)；中剂量组小鼠卵巢细胞的凋亡情况与对照组比较，差异有统计学意义(P005)；高剂量组小鼠卵巢细胞的凋亡情况与对照组比较，差异有统计学意义(P001) 表1 小鼠卵巢细胞凋亡的形态学变化（略） 注：与对照组比较，a P005，b P001；n=12 24 腹腔注射硫酸镍对小鼠卵巢细胞周期的影响(表2) 表2 NiSO4对小鼠卵巢细胞周期的影响（略） 由表2可见，不同剂量组细胞周期分布均以G0/G1期为主，而且随剂量增加G0/G1期细胞比较增高，表明该期细胞阻滞；G2、S期细胞比率下降；随剂量增加细胞凋亡率增加、PI降低(促进凋亡)、DI增加。 3 讨论 卵巢的主要功能表现为周期性的排卵及其分泌相应激素水平的周期性变化，同时伴有阴道上皮细胞学的周期性变化〔4〕。雌性动物发情周期有4个时期〔5〕，不同时相阴道脱落细胞学细胞形态不同。判定小鼠生理周期的主要依据是阴道上皮细胞类型〔6〕，其成熟程度与体内雌激素水平成正比〔7〕，大量白细胞和有核上皮说明体内雌激素水平较低，处于动情间期，持续出现该现象预示