养阴抗毒胶囊2号对阴虚大鼠糖皮质激素受体蛋白表达的影响.docVIP

养阴抗毒胶囊2号对阴虚大鼠糖皮质激素受体蛋白表达的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：养阴抗毒胶囊2号对阴虚大鼠糖皮质激素受体蛋白表达的影响 1 1材料和方法 2 1．1材料 2 1．2方法 3 文2：人参茎叶皂苷对热损伤大鼠不同脏器糖皮质激素受体的影响 7 1 材料与方法 8 2 结果 10 3 讨论 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 养阴抗毒胶囊2号对阴虚大鼠糖皮质激素受体蛋白表达的影响 文1：养阴抗毒胶囊2号对阴虚大鼠糖皮质激素受体蛋白表达的影响 养阴抗毒胶囊2号(yin antitoxic capsule 2, YC2)已临床应用多年，其作用为滋阴解毒，清热活血. 它对大剂量外源性糖皮质激素(glucocorticoid, GC)所致的阴虚症状有明显的改善作用. 前期试验证明YC2能有效的保护模型动物肾上腺皮质网状带不受大剂量外源性GC的破坏，明显改善GC作用下下丘脑垂体肾上腺(hypothalamicpituitaryadrenal, HPA)轴功能亢进状态，对GC所致的各种阴虚症状有很好的疗效［1-2］. 我们在前期研究的基础上继续观察该方对应用GC所致阴虚大鼠糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)的影响及调节作用，为临床进一步应用YC2 治疗 激素副反应提供了实验依据. 1材料和方法 1．1材料 动物清洁级SD大鼠32只，雄性，体质量(200±20) g（第四军医大学实验动物中心），合格证编号SCXK（军）. 饲养于第四军医大学实验动物中心清洁级动物实验室. 试剂YC2（第四军医大学唐都 医院 药剂科），批号. 药物组成：羚羊角、西洋参、石斛、生地黄、茜草、连翘、仙鹤草、大蓟、小蓟等. 将胶囊内药物再次粉碎，过100目筛， 使用前1 d加入蒸馏水配制成浓度为200 g/L的混悬液，4℃保存备用；桂附地黄丸(浓缩丸)（兰州佛慈集团），批号，将药丸加蒸馏水化解，制成含200 g/L药物的混悬液，4℃保存备用；氢化可的松（山东新华制药有限公司），批号，使用前加入蒸馏水配制成浓度为5 g/L的混悬液；速眠新Ⅱ注射液（军事医学 科学 院军事兽医研究所），批号（2004）005013；皮质醇（CORT）放射免疫分析试剂盒（北京北方生物技术研究所），批号051020；兔抗大鼠多克隆抗体，批号：sc1004（美国Santa Cruz公司）；即用型非生物素免疫组化EliVision plus检测试剂盒（福建迈新），批号：kit5901. 主要仪器美国16探头全自动测量γ计数仪；恒温离心机（TJL16GA，上海安亭）；奥林巴斯显微照相系统. 1．2方法 实验动物分组SD大鼠32只,随机分为空白对照组,阴虚模型(yin deficiency model control, YD)组,YC2组,桂附地黄丸(guifu dihuang balls, GFB)组（阴性对照组）4组，每组8只. 动物药物处理YC2组和GFB组在每天早晨按10 mL/kg浓度给予相应的药液灌胃，空白对照组及YD组给予同样体积饮用水灌胃，共3 d. 第4日起除空白对照组外，其余各组均按阴虚大鼠模型复制方法［3-4］，每日17：00按50 mg/kg剂量给予氢化可的松灌胃，连续4 d，空白对照组给予相应量饮用水. 各组均在造模结束1 d后（第9日）处死取血. 大鼠血浆皮质醇测定各组大鼠于第9日08：00~12：00间，以1 mL/kg剂量给速眠新Ⅱ，麻醉后心脏取血4 mL，4℃ 3000 min离心10 min分离血清, 用放射免疫法（RIA）测定血浆CORT(corticosteroid, CORT) 大鼠肝脏GR免疫组织化学分析大鼠处死后取适量肝脏组织. 置体积分数为40 g/L的甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋切片. 切片经常规脱水后，在体积分数为3 mL/L甲醇于室温下放置10 min. 去除内源性过氧化物酶，加人体积分数为100 mL/L山羊血清封闭非特异性背景15 min. 加1∶100稀释的兔抗大鼠GR一抗，24 h过夜，再使用非生物素免疫组化EliVision plus检测试剂盒，按试剂盒说明添加A液，B液， DAB显色，苏木素轻度复染，脱水，透明，中性树胶封固. 阴性对照用 mol／L PBS代替一抗，其余步骤不变. 统计学处理：大鼠血浆CORT测定的原始数据；免疫组化照片经灰度扫描转化为吸光度比值（imagepro 5）. 采用SPSS （ONEWAY ANOVA）程序进行方差齐性检验后，继而进行方差分析和LSD检验. 2结果 大鼠的表现YD组和G