聚合酶链反应及其相关技术.pptxVIP

会计学;;PCR反应的特点;一、PCR反应原理和反应过程;第4页/共101页;第5页/共101页;二、PCR的反应体系和反应条件;模板(Template);引 物（Primers) ;设计引物的原则;Tm is defined as the temperature at which half the molecules are single-stranded;第11页/共101页;第12页/共101页;Effect of % GC Content on Tm;Effect of [Salt] on Tm;脱氧核苷三磷酸（dNTP） ;DNA聚合酶(DNA polymerase);;;镁离子浓度;其它反应因素 ;PCR的反应条件 ;温度 ;时间 ;循环次数 ;指数增长期 平台期;;以PCR为基础的相关技术;以PCR为基础的相关技术;逆转录PCR（RT-PCR）;逆转录生成cDNA方式;第31页/共101页;定量PCR;相对定量PCR; 相对定量PCR;相对定量RT-PCR;不同模板量时线性扩增循环数的确定;不同循环次数时模板量的确定;相对定量PCR;B-actin; 相对定量PCR的优势与不足;对核酸扩增反应进行直接和动态监测，实现对靶基因的实时定量分析 ;;技术原理;DNA交联荧光染料技术;FRET技术;TaqManTM 技术原理;;第48页/共101页;临床标本实时定量PCR的扩增曲线; Relative Fluorescence;;;Ct;定量PCR的外参照系统;标准品的扩增曲线;r = 实测数据与所得标准曲线的线性吻合度;第57页/共101页;实时定量RT-PCR检测CEA基因拷贝数在监测胃肠癌微转移中的应用; CEA基因在消化系统上皮腺癌，尤 其是直结肠癌和胃癌中高表达，因 此在肿瘤细胞内可检测到其转录本。 在正常成人体内极少表达。 ;正常成人体内CEA基因表达状况;; 在肿瘤发生血道转移时，外周血中有少 量肿瘤细胞残留。用灵敏、特异的技术 检测到这些肿瘤细胞中CEA基因的转录 本，是发现肿瘤早期转移的关键。;胃肠癌患者外周血中CEA基因表达状况;多重PCR (Multiplex PCR );差异显示PCR（differential display PCR, DD-PCR）; 差异显示RT-PCR (Differential display RT-PCR);PCR诱导定点突变 (PCR mutagenesis);PCR产物中间引入点突变;PCR产物中引入片段性缺失;;;PCR-RFLP;RFLP诊断镰状细胞贫血;第74页/共101页;Southern blot analysis;Southern blot analysis;;PCR-SSCP;第79页/共101页;第80页/共101页;DGGE是一种筛查单碱基突变及多态性的方法 被检DNA双链分子的解链温度因存在突变而发生改变，从而使电泳迁移率发生改变 DGGE的突变检出率可达90%～100%;;Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE);第84页/共101页;第85页/共101页;熔点曲线分析(melting curve analysis);;第88页/共101页;第89页/共101页;高分辨率熔点分析技术（high resolution melting, HRM） ;;;;实验室设置 ;人员资质;过程的质量管理 ;分析中;分析中;分析后;谢 谢 ！;感谢您的观看。