基质金属蛋白酶在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预.docVIP

基质金属蛋白酶在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：基质金属蛋白酶在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预 1 1材料和方法 2 文2：转录因子Ets在肾脏细胞外基质重塑中的作用 7 1 Ets基因的发现 8 2 Ets家族的调控机制 9 3 转录因子Ets信号传导 9 4 Ets家族的生理作用 10 5 转录因子Ets与肾脏ECM重塑 11 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 15 正文 基质金属蛋白酶在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预 文1：基质金属蛋白酶在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预 0引言 基质金属蛋白酶（metalloproteinases, MMPs）是一类包含锌离子的内源性蛋白水解酶，是细胞外基质（ECM）的主要生理调节因子. 最近研究发现，MMPs在心梗后心衰的发病机制中具有重要的作用［1］. 转化生长因子β１（TGFβ1）被证实能促进组织纤维化和ECM积聚［２，３］. 有关延缓或防止心肌重塑的 发展 及其相关机制的研究，一直是心血管领域的热点. 我们旨在探讨MMP9及其生理性抑制剂TIMP1和TGFβ1在大鼠心肌肥厚及细胞外基质重塑过程中的作用及氯沙坦的防治作用. 1材料和方法 材料动物模型及分组： 雄性SD大鼠25只（南京医科大学动物实验中心），体质量250~280 g，随机分为3组: ①对照组（n=8）；②去甲肾上腺素组(norepinephrine, NE) (n=8)；③NE+氯沙坦（默沙东公司）(n=9). NE注射液 mg#12539;kg-1#12539;d-1, 腹腔注射,2次#12539;d-1，连续给药15 d，制备心肌肥厚模型，对照组腹腔注射生理盐水及蒸馏水灌胃. 氯沙坦10 mg#12539;kg-1#12539;d-1早晨1次灌胃给药，疗程15 d. 方法 超声心动图检查3组动物在实验前及 治疗 后15 d进行超声心动图检查，方法如下：大鼠麻醉后固定，连接心电图，应用美国HP Sonos5500型彩色超声诊断仪，探头频率~ MHz，取胸骨旁左室短轴切面，在二尖瓣腱索水平记录M型超声运动曲线后，分别测量舒张末期室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、左室舒张末期内径(LVEDd)和左室收缩末期内径(LVESd)， 计算 短轴缩短率（FS）和射血分数(EF). 应用脉冲波多普勒超声测量舒张早期(E峰)和舒张晚期(A峰)的最大流速并计算E／A比值. 各指标均在连续3个心动周期上测量后取其平均值. 病理检查①左心室质量和体质量的测定：动物称质量后处死，取出心脏，分离左、右心室，用 电子 天平称取左心室质量(LVM)，计算左心室质量与体质量比(LVM/BW)表示左心室肥厚的程度. ②心肌胶原形态学的观察及定量分析：部分左室心肌组织，40 g#12539;L-1甲醛液固定，石蜡包埋，4 μm切片. VanGieson(VG)染色法使胶原特殊染色，光镜检查，心肌细胞呈黄色，胶原呈红色，并用全自动图像分析仪行图像处理. 每个标本选一个切片，测量左心室心肌的胶原容积分数(CVF)(左心室胶原面积/所测视野面积). 随机取4个视野，以均值作为该心脏的CVF. 免疫组化方法测定心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原、MMP9, TIMP1, TGFβ1蛋白表达石蜡切片常规脱蜡至水，3 mL#12539;L-1过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，热修复抗原后，100 mL#12539;L-1正常山羊血清封闭非特异性抗原. 滴加一抗（1∶100稀释）（购自武汉博士德生物公司），4℃过夜. 滴加生物素标记的二抗；37℃孵育30 min；滴加辣根酶标记的链霉卵白素工作液；DAB显色，封片. 以TBS代替一抗作阴性对照. 应用多功能彩色图像分析系统对I型和III型胶原（心肌细胞间隙及血管周围棕色条纹）、MMP9, TIMP1, TGFβ1蛋白（细胞质中棕褐色颗粒为阳性）表达进行图像分析，表达强度用平均灰度值表示. 逆转录聚合酶链反应法（RTPCR）方法检测MMP9, TIMP1和TGFβ1 mRNA表达① MMP9 cDNA引物: 上游序列5′CCCTGCGTATTTCCATTCATC3′下游序列5′ACCCCACTTCTTGTCAGCGTC3′，二引物之间扩增片段含300个核苷酸; TIMP1: 上游序列5′CCCAACCCACCCACAGACAGC3′, 下游序列5′AACGGCCCGCGATGAGAAACT3′二引物之间扩增片段含254个核苷酸;TGFβ1: 上游序列5′ CTGGTTGGGAGA