白藜芦醇诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制.docVIP

白藜芦醇诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：白藜芦醇诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制 1 1材料和方法 2 文2：中药诱导肿瘤细胞凋亡研究进展 5 1 阻滞肿瘤细胞增殖周期 5 2 影响癌基因和抑癌基因的表达 6 3 抑制端粒酶活性 8 4 影响细胞凋亡信号传导 9 5 展 望 11 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 白藜芦醇诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制 文1：白藜芦醇诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制 0引言 白藜芦醇（Resveratrol，RES）是一种重要的活性化合物，广泛存在于植物中. 具有顺式及反式两种结构,反式具有生物学活性. 其化学名为反3，4′，5三羟基芪，它所具有的对心血管疾病和肿瘤的预防和保健作用已在国际上引起广泛的关注及深入研究. RES有广泛抗癌和防癌作用，在致癌作用的3个主要阶段均［1］具有化学防癌活性. 因此，我们以RES分别诱导人肝癌HepG2和慢粒K562肿瘤细胞凋亡的影响及作用来探讨RES诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的机制. 1材料和方法 材料 人肝癌HepG2和慢粒K562细胞由第四军医大学生物化学与分子生物学教研室第四实验室冻存. RES购于Sigma公司,溶于二甲基亚砜（DMSO, 购于Sigma公司）,浓度稀释为5×106 mol/L,-20℃备用. RPMI 1640和新生牛血清购自Invitrogen公司. MTT购于华美生物工程公司，溶于1×PBS（10 mmol/L, pH ）使浓度为5 g/L， μm的微孔过滤除菌后4℃备用. DNA荧光染料(PI和Annexin V)购于Coulter公司，4℃备用. 方法 细胞培养人肝癌1×105 HepG2和慢粒K562细胞培养于含100 mL/L新生牛血清的RPMI 1640培养液中，加入1×105 ｕ/L青霉素,100 mg/L链霉素,置于孵箱，在37℃,50 mL/L CO2饱和湿度的条件下培养，实验时取对数生长期细胞. 形态学观察以5,10,20,50和100 μmol/L RES作用细胞，24~72 h后免疫相差倒置显微镜下观察HepG2和K562细胞形态变化情况. V荧光染色检测细胞凋亡收集1×106细胞(HepG2细胞在收集前已用Annexin V 5 μL 37℃孵育10 min), PBS洗2遍，800～1000 min离心5 min，弃上清，加入预冷的结合缓冲液重悬细胞，加入5 μL PI和5 μL Annexin V于细胞悬液中（每份样品均设立凋亡细胞阴性对照和阳性对照,以调整样品检测的最佳工作电压和双色荧光补偿）, 轻轻混匀后4℃避光染色10 min，流式细胞术（FCM)分析. 检测细胞周期收集1×106细胞, PBS洗2遍，800~1000 min离心5 min，弃上清，加入1 mL生理盐水制成单细胞悬液. 加入预冷的无水乙醇2 mL快速混匀，固定细胞. 弃固定液，PBS洗2遍，1000 min离心5 min，加入1 mL DNA荧光染料PI，4℃避光染色15 min，FCM分析. 四唑蓝比色法（MTT）检测RES对细胞生长的影响收集细胞，将细胞重新接种至96孔板中，使其每孔细胞数为1×103~1×104个，分别以20,50和100 μmol/L RES作用细胞，加入100 mL/L新生牛血清的RPMI 1640培养液培养. 于加药后24, 48和72 h进行检测. 每孔加入MTT溶液20 μL, 37℃继续培养4 h后弃上清，每孔加入150 μL DMSO溶解样品,用酶联免疫检测仪测定各孔490 nm吸光度值， 计算 均值，绘制生长曲线. 2结果 作用后肿瘤细胞形态的变化经RES 5～100 μmol/L作用后，免疫相差倒置显微镜下可见HepG2细胞典型凋亡细胞形态学特征：细胞体积缩小，胞质浓缩，胞核固定，染色体凝集，有的形成凋亡小体. 随作用时间延长可见坏死细胞增多，表现为细胞肿胀，破碎（Fig 1，2）.但K562细胞无明显变化. 对细胞周期的作用RES作用于K562细胞和HepG2细胞48 h时，FCM检测细胞周期虽无明显细胞周期G1期前subG1峰，但K562细胞G1期细胞数占检测细胞的百分比为%,G2期为%,凋亡率为%；HepG2细胞G1期为%,G2期为%,凋亡率为%. 由此检测到RES作用后HepG2细胞周期明显被阻止于G1期. 作用后肿瘤细胞的凋亡不同浓度的RES对K562细胞凋亡无明显作用，而对HepG2细胞凋亡作用较为明显，凋亡与坏死共存. 随着时间的延长坏死