辛伐他汀对肾移植后高脂血症患者RANTES及其受体CCR5mRNA表达的影响.docVIP

辛伐他汀对肾移植后高脂血症患者RANTES及其受体CCR5mRNA表达的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：辛伐他汀对肾移植后高脂血症患者RANTES及其受体CCR5mRNA表达的影响 1 1材料和方法 2 文2：短期应用辛伐他汀对急性冠脉综合征患者HSCRP的影响 5 1 对象与方法 5 2 结果 6 3 讨论 7 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 9 文章致谢（模板） 9 正文 辛伐他汀对肾移植后高脂血症患者RANTES及其受体CCR5mRNA表达的影响 文1：辛伐他汀对肾移植后高脂血症患者RANTES及其受体CCR5mRNA表达的影响 0引言 肾移植后约半数以上患者发生脂代谢紊乱，主要表现为胆固醇（cholesterol, CH），三酰甘油(triglyceride, TG)，低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）升高，高密度脂蛋白（HDL）降低［1］. 高脂血症不但是移植后心血管疾病发生的危险因子，也是移植肾慢性排斥发生的重要原因［2］. 趋化因子（chemokine）受体CCR5（chemokine receptor 5）是RANTES（regulated on activation normal Tcell expressed and secreted）的主要受体. 我们应用RTPCR方法检测肾移植术后高脂血症患者外周血中RANTES及其受体CCR5 mRNA水平，并观察辛伐他汀降脂治疗对其影响如下. 1材料和方法 材料 肾移植患者60例，原发病为慢性肾小球肾炎，移植前血清总胆固醇（total cholesterol,TC），TG水平正常；术后6~8 mo：① 血脂正常组：TC mmol/L或(和)TG mmol/L，30（男16，女14）例，年龄（40±10）岁；②血脂增高组：TC mmol/L或(和)TG mmol/L，30（男17，女13）例，年龄（41±9）岁；血脂增高组予辛伐他汀治疗 mo和3 mo时收集标本，即为 mo治疗组和3 mo治疗组. 对照组为健康体检者30(男15，女15)例，年龄（40±9）岁. 抽取空腹静脉血，分成2份，一份检测血脂水平，一份分离外周单个核细胞(peripheral mononuclear cell, PMNC) 抽提总RNA. 抽血前1 mo内无感染性疾病史. 淋巴细胞分离液Ficol购自上海生物制品所；Trizol，氯仿，异丙醇，MMLV逆转录酶、RNA酶抑制剂， mol/L DTT，随机引物，dNTP，购自Gibco公司；Taq DNA聚合酶， mmol/L MgCl2，琼脂糖，购自Promega公司. 方法 血标本抽取PMNC转移至无Rnase的Ependoff管中，加Trizol 1 mL，剧烈震荡，室温放置5 min，加氯仿 mL，2000 g 4℃离心15 min. 转移上清液至另一Ependoff管中，加异丙醇 mL，室温静置10 min，12 000 g, 4℃离心15 min，弃去上清液，加750 mL/L乙醇1 mL，12 000 g, 4℃离心10 min；弃去上清液，室温干燥5~10 min，加EDPC水20 μL混匀，取1 μL以纯水稀释100倍，紫外分光光度计测A值与RNA浓度. RTPCR引物：Nucleotide上查找RANTES和CCR5基因序列，Primer3软件设计，Takara公司合成. 引物序列及扩增产物长度如下：RANTES上游引物 AGCTACTCGGGAGGCTAAGG，下游引物GAGGCATGCTGACTTCCTTC，产物长度276 bp；CCR5上游引物TAGTCATCTTGGGGCTGGTC，下游引物TGTAGGGAGCCCAGAAGAGA，产物长度168 bp；βactin上游引物TGGCACACCTTCTACAATGAGCT，下游引物CGTCATACTCCTTGCTCCACATCTGC，产物长度838 bp. 取RNA 1 μg,随机引物1 μL,dNTP 1 μL，加DEPC水至 μL，70℃预变性5 min；加5×Buffer 5 μL, mol/L DTT 2 μL,RNA酶抑制剂 μL,MMLV逆转录酶 1 μL，37℃ 1 h，95℃ 5 min，加150 μL纯水稀释，取1 μL紫外分光光度计测A值与cDNA浓度. PCR反应：10×Buffer 5 μL, mmol/L MgCl2 4 μL,dNTP 200 μmol/L,Taq DNA聚合酶 U、相应上下游引物各1 μL，加双蒸水至50 μL，95℃预变性3 min，进入循环：94℃30 s，57℃ 45 s，72℃ 1 m