己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制医学.docVIP

己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制医学 1 1材料和方法 2 文2：调中颗粒对大鼠混合反流性食管炎的治疗作用及其机制 6 1 材料与方法 8 2 结 果 11 3 讨 论 12 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 16 文章致谢（模板） 16 正文 己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制医学 文1：己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制医学 0引言 溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）发病机制尚未明确，在活动期肠粘膜呈弥漫性充血水肿，且有出血点、溃疡存在. UC与血栓及血栓前状态有密切的关系，并应用肝素治疗取得一定疗效［1-2］. 抗凝常用药己酮可可碱毒副作用小，使用安全，有抗血小板、抗脂质过氧化、免疫抑制作用等，因此可能对UC具有一定的抗炎作用. 本研究旨在探讨己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎模型的治疗作用及其作用机理. 1材料和方法 材料 健康SD大鼠(由上海实验动物中心提供) 60只，雄性，体质量150～200 g，正常喂养； 2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)为Sigma公司产品，血管性假血友病因子相关抗原（vWF∶Ag）, 血栓烷B2 （TXB2）检测试剂盒，由苏州大学医学院血栓与止血研究室提供；细胞内粘附分子1（ICAM1）试剂盒购自华美公司. SH293智能血液凝聚仪(购自上海生化仪器厂) ，血小板粘附两用仪(无锡 电子 仪器二厂产)；己酮可可碱（PTX）(上海第十六制药厂提供) 方法 动物分组及处理 将60只大鼠随机分为正常对照组(简称N组), 模型组(简称M组), 模型+生理盐水组（简称组），模型+己酮可可碱组（简称PTX组）. 正常对照组、模型组各20只，其余每组10只. 正常对照组不作任何处理. 大鼠UC模型的建立及处理 SD大鼠术前禁食24 h，自由饮水，实验时乙醚麻醉，用一直径 mm, 长约12 cm的硅胶管由肛门轻缓插入深约8 cm，实验各组以含150 mg/kg TNBS的等体积乙醇溶液 mL缓慢注入结肠，让动物保持平躺， 自然 清醒. 模型造成后（第4日），N组、M组各随机选10只大鼠，禁食两天后断颈处死，处死前穿刺心脏取血，每只约2~3 mL，冻存备用，所剩10只正常喂养. 组以生理盐水2 mL/次，PTX组按8 mg/kg(溶解于2 mL生理盐水中)灌胃，2次/d. 3 wk各组大鼠全部处死，处死前穿刺心脏取血，每只约2~3 mL，冻存备用. 所有处死大鼠，剖取远端结肠8 cm，沿纵轴切开，生理盐水迅速冲净，置于标本体积10倍以上的甲醛溶液中固定. 结肠粘膜损伤评分 大体形态评分：将福尔马林固定后的结肠标本肠粘膜层向上平铺于硬纸板上，用大头针固定，并保持在生理盐水中，用放大镜观察粘膜急性损伤程度，并按下列标准评分：0分：无损伤；1分：局部充血、水肿但未出现溃疡；2分：有溃疡，但没有明显炎症；3分：有溃疡，仅有一处出现炎症；4 分：有多处溃疡和炎症，溃疡大小1 cm；5分：有多处溃疡和炎症：至少有一处溃疡大小1 cm. 组织学损伤评分：包括溃疡炎症肉芽肿、纤维化，按有无及轻重计为0，1，2 分，病变深度(达粘膜下层1分，肌层2分，浆膜层3分) 各项相加得总分. 血清指标检测方法 采用ELISA法检测TXB2，单克隆酶联吸附法检测vWF∶Ag，酶联免疫吸附法检测ICAM1(均按试剂盒说明). 血小板粘附两用仪检测血小板粘附功能(PAdT), 32 g/L枸橼酸钠按1∶9抗凝；用SH293智能血液凝聚仪检测血小板的聚集功能(PAgT)，用2 μmol/L二磷酸腺苷作诱导剂，测定最大聚集率. 统计学处理：实验结果以x±s表示，采用SPSS 软件包进行方差分析及多重比较. 2结果 一般情况 大鼠造模型1 d后，开始逐渐出现懒动、拱背、厌食、大便次数增多、软便或稀便、大便末端有粘液或脓点等表现. 3 d后症状达到高峰,大鼠毛色无华、变脆，嗜卧扎堆，大便完全为稀便，带脓血. N组大鼠无腹泻、懒动等异常改变. 肠组织大体形态 造模型3 d后，M组处死大鼠结肠标本表现为黏膜充血、水肿、溃疡形成，结肠组织与周围组织粘连. 而N组结肠标本粘膜光滑，无溃疡，腺体排列整齐(图1A,B) 对大鼠溃疡性结肠炎大体形态及组织学损伤的影响 M组组大鼠结肠标本表现为黏膜充血、水肿、溃疡形成，结肠组织与周围组织粘连，可见近端肠腔扩张. 溃疡呈线状和灶状，周围可见黏膜增厚、肠腔狭窄. 光镜下可见溃疡及炎性渗出物，可见上皮细胞坏死、脱落，有淋巴组织增生，大量中性粒细胞浸润，可见数量不等的单个核细胞