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伽玛刀对红藻酸致痫大鼠学习记忆能力的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：伽玛刀对红藻酸致痫大鼠学习记忆能力的影响 1 1材料和方法 2 文2：重复经颅磁刺激对大鼠空间学习记忆能力的影响 5 1 材料和方法 7 2 实验结果 9 3次空间搜索实验 9 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 伽玛刀对红藻酸致痫大鼠学习记忆能力的影响 文1：伽玛刀对红藻酸致痫大鼠学习记忆能力的影响 0引言 丁酸钠是一种四碳脂肪酸盐，是重要的肠道黏膜营养剂. 研究证实丁酸钠能抑制胃癌、肝癌、结肠癌等肿瘤细胞增殖, 促进肿瘤细胞分化，改变瘤细胞形态结构及基因表达，诱导细胞凋亡［1-3］，因而丁酸钠作为一种极具潜力的抗癌药物越来越受到关注. NDRG1基因是一种与细胞分化有关的基因，升高其表达可抑制肿瘤细胞的增殖［4-5］. 我们采用MTT实验及流式细胞技术检测丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞后细胞增殖和细胞周期的变化，并观察丁酸钠对NDRG1表达的影响，为丁酸钠用于食管癌诱导分化 治疗 提供理论依据. 1材料和方法 材料 食管癌EC9706细胞系由 中国 医学 科学 院肿瘤 医院 分子肿瘤学国家重点实验室赠送. 丁酸钠（serva feinbiochemica heidelberg公司），RPMI 1640细胞培养基（Gibco brL公司）,胎牛血清（杭州四季青生物工程公司），羊抗人NDRG1多克隆抗体（Santa Cruz生物技术公司），丫啶橙(Sigma公司)，CO2孵育箱（美国Forma Scientific公司），流式细胞仪（德国Partec PAS公司），Fax250酶标仪（英国Stat公司） 方法 细胞培养 将人食管癌EC9706细胞单层贴壁生长于含100 mL/L胎牛血清的RPMI 1640培养液中，种植于含盖玻片的六孔板及75 cm2培养瓶中. 37℃, 50 mL/L CO2培养箱中培养，隔日换液，取对数生长期细胞进行试验. 实验 取对数生长期的EC9706细胞,调整细胞密度为×107/L,按每孔 mL接种于96孔细胞培养板中. 设空白对照组和 mmoL/L丁酸钠实验组,每组均设10个复孔. 实验终止前4 h向细胞液中加入MTT 20 μL,细胞被染色后以二甲亚砜200 μL溶解甲瓒颗粒,于酶标仪上测定A492 nm. 实验重复2次. 细胞抑制率= ［(A对照-A实验)/A对照］×100% 丁酸钠处理及细胞周期检测 用RPMI 1640培养液将丁酸钠调终浓度为 mmol/L,对照组为不含丁酸钠的培养液. 取丁酸钠作用1, 3, 5 d的细胞爬片及对照组细胞爬片从六孔板取出后经pH 的PBS冲洗，800 mL/L丙酮固定30 min后用中性树胶黏于载玻片上，4℃保存，用于免疫组化实验. 分别取丁酸钠作用1, 3, 5 d的细胞进行如下处理：培养瓶中的细胞经pH 的PBS冲洗后加入2 g/L胰蛋白酶消化，离心后用预冷的PBS洗涤2次，加入700 mL/L乙醇 mL固定细胞用于细胞周期测定. 上机前将细胞离心洗涤制成单细胞悬液,加丫啶橙染色,暗室放置,300目尼龙膜过滤,用流式细胞仪检测细胞周期分布. 细胞免疫组织化学染色 采用SP试剂盒进行免疫组化实验. 按说明书步骤进行操作，DAB显色，苏木素复染，光镜观察细胞显色强度. 结果判定：在高倍镜下观察免疫组化着色情况，以信号强弱评定NDRG1表达的强弱. 统计学处理： 采用SPSS 软件进行统计学处理，数据均采用x±s表示,检验水准α=. 2结果 检测不同时间的各组平均吸光度值均低于对照组，其差异有显著性意义（P，表1）；随丁酸钠作用时间延长，其抑制率升高.表1丁酸钠对人食管癌细胞EC9706的增殖抑制作用确良（略） 丁酸钠对食管癌细胞细胞周期的影响 实验组G1期细胞比例与对照组比较明显增高,而S,M期细胞比例减少，经统计学处理，差异有显著性意义（P,表2）.表2丁酸钠对食管癌EC9706细胞周期的影响（略） 丁酸钠对食管癌细胞NDRG1蛋白表达的影响 免疫组化染色结果显示，在作用1～5 d时，细胞胞质黄色着色较对照组明显加深，且随作用时间延长而增强（图1） 3讨论 食管癌是人类常见的消化道恶性肿瘤，食管癌的 治疗 方法除手术治疗、放疗等方法外，还有许多新的治疗方法，如基因治疗、免疫治疗、抗血管生成治疗、诱导分化治疗等［6］. 其中诱导分化治疗是肿瘤化学治疗的一个新领域. 诱导分化是指恶性肿瘤在体内外分化诱导剂存在下，细胞恶性行为降低，恶性表性发生改变，形态学趋于正常，呈现出向良性或趋向良性细胞分化的现象. 利用分化诱导剂可