过表达optn和tau-p301-l基因腺相关病毒构建与鉴定.docxVIP

同翁出版时何：2O2O-9-24 1O：58 网烙出版地址：血.：〃临. cnki. net/kcmH/(fclail/34. 1065. K1150.00l.html ?基础医学研究。 过表达OPTN和TAU-P301-L基因腺相关病毒构建与鉴定 陈嗤，王鹏I .徐恰2 .刘会郭若文，.刘芸许尹，，秦宜德 摘要 目的 狭IU能姓过去达OPTN和TAU?P301?L基因的 重fflBS相关钢毒，检测其在体外对293T细胞的贼染,并且为 阿尔茨海欧氏耕(AD)研究提供新思路。方法 从含有目的 基因的大肠肝常中提取包涵目的基因的质粒.利用PCR扩 增获街目的基因.日的基因OPTN构建到 g/RES%. gnl栽体，目的基因TAU-P3O1L-V5构建到pAAVCMK mka^lRES ft体。鉴定版粒阳性克隆并测序。重组质粒 pAAV?JRESmGr?nl?AAW?OPTN 和 pAAV-CMV-mkatcJRES- AAV9 TAU P30\h\5分别与包装成粒-M/AC9、辅助质般 pHelper通过Lipofiter^ZOOO共转染293T绒胞.获得A4I9病 毒 利用相同方法.不使用日的基因构建对应嫁色和红色 心四对照病毒qPCR法测定重期踪相关病毒栽体滴度,病 毒锻体感染293T细陋进行耕寿右效性及安全性掉定.WO e blotting和RT-PCR进彳j