利用尿素酶试验测定结核分支杆菌耐药性的方法学研究.docVIP

利用尿素酶试验测定结核分支杆菌耐药性的方法学研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：利用尿素酶试验测定结核分支杆菌耐药性的方法学研究 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：神奇灵颗粒剂中总蛋白含量测定的方法学研究 7 1 器材 8 2 方法与结果 8 3 讨论 11 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 利用尿素酶试验测定结核分支杆菌耐药性的方法学研究 文1：利用尿素酶试验测定结核分支杆菌耐药性的方法学研究 Abstract Objective:To determinate drug resistance of tubercle bacillus by employing urease test．Methods: The observed purified mycobacterium were inoculated into the specific autoclaved fluid mycobacterium medium with urea and Phenol Red, and incubated with different concentration of anti-tubercle bacillus drugs until the corresponding negative and positive results became apparent．Results: The results became apparent at 3 to 7 days when mount of the incubated mycobacterium is more than 500 cfu/mL, and 7 to 10 days when mount is less than 500 cfu/ml. To avoid the fake positive samples, the positive mycobacteriums were heating-killed and all tested as negative by urease test．Compared with traditional absolute concentration method, urease test method had no statistic differences (χ２=，P＞)。Conclusion: Urease　testing is a convenient and rapid method to ipect drug resistance of mycobacterium tuberculosis. Key words Mycobacterium tuberculosis；Urease；Drug resistance 尿素酶是一种胞外酶，多数细菌含有该酶，可分解尿素，使环境变碱，所以，常用尿素酶试验来进行细菌的鉴定。分枝杆菌多数菌种含有尿素酶，如结核分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、胃分枝杆菌均为阳性。而这些分枝杆菌是临床结核病的主要病原体。 尿素酶的存在是结核菌具有活性的标志之一，如果在培养中加入某种药，控制了该酶的产生，则说明某种药物对结核分枝杆菌有杀菌效果。否则尿素酶继续产生，利用该机制我们设计了结核分枝杆菌耐药性的尿素酶测定试验。现将我们的研究结果报告如下。 1 材料与方法 材料 菌种：本室保存的耐药结核分枝杆菌菌株，临床标本常规处理后，分离培养鉴定结核分枝杆菌菌株。对照菌株购自 中国 生物药物鉴定所细菌室（菌株编号H37RV） 培养基：绝对浓度法采用豆浸液改良罗氏培养基［１］；尿素酶法采用含尿素和酚红指示剂的结核分枝杆菌液体培养基（苏通氏培养基） 抗痨药物：14种抗痨药物均购自上海医药集团有限责任公司信宜制药总厂，其中利福平(RFP)、 异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、 利福定 (RFD)、利福喷丁(RFPD)、吡嗪酰胺（PAZ）、立刻肺疾、卷曲霉素(CPM)、环丝氨酸(CS)取得该厂的纯品药物；而卡那霉素(KM) 、对氨柳酸（PAS）、丁胺卡那、奥复星、链霉素(SM) 使用该厂的注射用瓶装药，取得了该厂此批药物的药物效价，并严格按照结核病诊断细菌学检验规程中,抗结核药物溶液配制及稀释的方法进行计量的折算［１］ 方法 含尿素结核分枝杆菌培养基的制备：成分：天门冬酸 g,枸橼酸 g, k2HpO4 g,MgSO4·7H2O g，%酚红25 mL,枸橼酸铁铵 g,甘油 60 mL,蒸馏水1 000 mL，尿素 12 g(%)［１］，另外采