DNMT3B基因启动子C46359T多态性与食管癌易感性的关联分析.docVIP

DNMT3B基因启动子C46359T多态性与食管癌易感性的关联分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：DNMT3B基因启动子C46359T多态性与食管癌易感性的关联分析 1 1 材料和方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 5 文2：CD14基因启动子多态性与冠心病的关系 6 1对象和方法 6 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 DNMT3B基因启动子C46359T多态性与食管癌易感性的关联分析 文1：DNMT3B基因启动子C46359T多态性与食管癌易感性的关联分析 肿瘤的病因学，尤其是其与某些遗传性疾患关系的研究已表明,大多数人类恶性肿瘤是由环境因素作用于遗传物质的结果［1］，遗传因素越来越被认为是癌症发病风险的主要因素之一［23］。尽管有些基因突变可以导致肿瘤，但是对于大多数人来说，患肿瘤的风险可能来自于相对常见的低外显率的疾病相关多态性的差异［3］。肿瘤不仅是遗传性疾病，同时也是由基因转录沉默所引起的表观遗传性疾病。在一些人类肿瘤细胞中，启动子区CpG岛的重新甲基化可能是肿瘤抑制基因失活的机制［4］。DNA甲基化的异常是最常见的表观遗传学改变，DNA甲基化是由一组DNA甲基转移酶(DNA methyltraferase，DNMT)家族催化的，目前在哺乳动物中确定的DNMT有DNMT1、DNMT3A和DNMT3B［57］。其中，DNMT1主要负责维持甲基化，而DNMT3A和DNMT3B主要负责重新甲基化［6，8］。DNMT3B在肿瘤形成过程中起重要作用，已经发现在肿瘤细胞中存在DNMT3B的高表达 ［5］。DNMT3B基因定位于20号染色体，在距转录起始位点-149碱基对的启动子区含有C→T转换多态性（C46359T），体外实验表明，该位点的转换可以使DNMT3B启动子的活性增加30% ［9］ 食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在 发展 中国家居第5位，我国的食管癌死亡率居世界首位［10］。早期食管癌经手术切除后5年生存率可达90％以上，而中晚期患者仅为6％～15％［1112］。如果能够做到早期诊断或易感风险评估，则有可能降低食管癌的死亡率。本研究选择江苏地区汉族人群，探讨DNMT3B基因C46359T位点基因多态性与该地区人群食管癌遗传易感性之间的关联。 1 材料和方法 材料 病例组选自2007年2月～2007年7月在江苏省肿瘤 医院 、南京军区南京总医院保存的食管癌病人血液样本195例，其中男153例，女42例，所有病例临床资料完整。血液标本采集前均未有抗肿瘤药物使用记录。对照组为健康人血液样本189例，其中性别、年龄等均与病例组相匹配，男135例，女54例, 见表1。两组人群均系江苏地区汉族人群，个体之间均无血缘关系。 方法 基因组DNA抽提 采集静脉全血2ml，乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2)抗凝，常规蛋白酶K消化后苯酚／氯仿抽提，乙醇沉淀法提取基因组DNA［6］，总共提取食管癌患者、健康正常人外周血 DNA 384例，提取的DNA溶解于 TE中，4℃保存。表1 病例组与对照组样本间年龄和性别分布频率比较例 注：括弧中为所占百分比 PCR PCR引物序列见 文献 ［13］，上游5′TGCTGTGACAGGCAGAGCAG3′(nt 46151–46170)，下游5′GGTAGCCGGGAACTCCACGG3′(nt 46530–46511)，扩增产物380bp。25μl反应体系含dNTPs ·L-1，上下游引物各10pmol，Taq DNA聚合酶1．25U，μl(100ng)，·L-1。95℃预变性5min；95℃30s，69℃30s，共32个循环，最后72℃延伸10min。PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色观察。 限制性内切酶BlnⅠ酶切反应 20μl酶切反应体系含10×K Buffer μl，BlnⅠ(TaKaRa公司) 4U，PCR产物μl，混匀后37℃水浴中酶切过夜。酶切产物于％琼脂糖凝胶电泳分析基因型。 DNA序列测定 选择凝胶电泳证实为CT基因型、TT基因型各2例，由南京金思特公司经双脱氧链终止法测序。 统计学处理 采用SPSS13．0统计软件进行卡方检验， 计算 Ｐ值、OR值和95%CI。 2 结 果 一般资料的统计学检验 经双侧卡方检验，在病例与对照组中，年龄在40～60岁和60岁的分别为%/% 和%/%，男、女分别为%/% 和%/%，均无统计学差异（Ｐ），见表1。 DNMT3B启动子C46359T PCR产物分析 PCR产物为380bp的片段，经琼脂糖凝胶电泳鉴定,结果见图1。经限制性内切酶BlnⅠ酶切后，当nt4635