《饲料学》实验指导.docVIP

实验一 豆饼（粕）热处理质量评定（化学指标检测） 一 蛋白溶解度（Protein Solubility） 1.定氮法 按Dale等（1987）提出的方法进行测定。样品全部粉碎至60目（mesh）。称取1.5g样本于250m1烧杯中，加入75ml 0.2%的KOH溶液，搅拌20分钟，再离10分钟，取15m1上清液定氮，测碱溶性蛋白的含量。 蛋白质溶解度（%）=15ml上清液中的蛋白质含量/原样中的蛋白质含量×100% 2.考马斯亮蓝法 按Kratzer等（1990）提出的方法检测。取40mg的豆粕试样于50ml三角瓶中，加入10ml 0.2%KOH溶液。内溶物搅拌3—4次。10分钟后用l号Whatman滤纸过滤，吸取1m1上清液，用5ml的NaCl—Pi缓冲液稀释。取0.5m1此稀释液于15ml试管中，同时用0；5m1的混合液（此混合液为1ml 0.2%KOH溶液，5ml缓冲液的混合液）作空白。每个试管加入9.5ml考马斯亮蓝染色液，混合后，放置5分钟。在595nm处比色，并用空白调零。同时用溶菌酶蛋白质制作标准曲线。 染色液的配制：将50毫克考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%的乙醇中，然后加入50毫升85%的磷酸，混合，冷却后用去离子水稀释到1000毫升。 考马斯亮蓝值＝从标准曲线上查得的药品碱性蛋白质的RPE含量/样品的粗蛋白含量×100% 二 DBL法测定