《蛋白质生化技术》实验指导.docVIP

实验一 Bradford法测定蛋白质浓度 1.目的： 练习标准曲线的制作，比较不同pH值的蛋白质标准溶液对测定的影响。 2.试剂： ①显色剂：取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85%（w/v）磷酸，将溶液用水稀释到1000ml。 ②BSA标准溶液（1000μg/ml），分别用0.01N盐酸，去离子水，0.01N NaOH溶液配制，4℃冰箱放置可保存一周。 3.设备与仪器： 微量注射器：一支用于专吸BSA；一支用于专吸dH2O 岛津UV-265紫外可见光分光光度计 4.操作程序： 试管号 1 2 3 4 5 6 BSA（μl） 0 10 20 40 70 100 去离子水（μl） 100 90 80 60 30 0 显色剂（ml） 5 5 5 5 5 5 加显色剂混匀，静止2min后测定OD595，建立标准曲线 注：①显色液中G-250，出现沉淀不能用。 ②定容BSA标准液时，混合次数，以保证混匀。 实验二 蛋白质的浓缩（PEG法） 1.原理 干PEG粉末吸收水分和盐类，大分子溶液即被浓缩。PEG吸收水分的速度很快，为防止PEG进入蛋白质溶液，最好选用分子量大的PEG。一般用分子量为20000的PEG。 2.试剂与设备 牛血清白蛋白（BSA），聚乙二醇（PEG），玻璃纸，岛津UV-265紫外可见光分光光度计 3.操作 将一定浓度的BSA溶