净水剂微生物分离纯化与鉴定..docVIP

净水剂微生物的分别纯化与判定. 净水剂微生物的分别纯化与判定. 净水剂微生物的分别纯化与判定. 一、目的要求 [1] 1． 经过从土壤中分别纯化细菌，掌握培育基的制备与灭菌技术、微生物的分别 纯化方法和无菌操作技术。 2． 掌握常用的微生物判定方法及革兰氏染色方法， 掌握生理生化试验的原理与 方法。 3． 掌握微生物的判定技术、菌种收藏技术。 二、基来源理 1． 培育基的配制与灭菌。 培育基是人工配制的适合微生物生长生殖或累积代谢产物的营养基质，用以培育、分别、判定、保留各样微生物或累积代谢产物。在自然界中，微生物种类众多，营养种类多样，加之实验和研究的目的不同，所以培育基的种类好多。可是，不同种类的培育基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长要素等。配制培育基是不单需要考虑知足这些营养成分的 需求，并且应当注意各营养成分之间的协调。其余不同微生物对 pH 要求不相同，酵母的培育基的 pH 一般是偏酸性的， 而细菌和放线菌的培育基的 pH 一般为中性或微碱性 ( 嗜碱细菌和嗜酸细菌例外 ) 。所以配制培育基时都要依据不同微生物的要求将培育基的 pH 调到适合的范围。 配制培育基的流程以下： 原料称量 → 溶解 加琼脂消融 调理 pH值 分装 塞棉塞和包装 灭菌 因为配制培育的各种营养物质和容器等含有各样微生物，所以，已配制好的培育基一定立刻灭菌，假如来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防备此中的微生物生长生殖而耗费养分和改变培育的酸碱度所带来不利的影响。 实验室最常用的灭菌方法是利用高温办理达到杀菌成效。高温的致死作用，主假如使微生物的蛋白质和核酸等重要大分子发生变性。高压蒸汽灭菌是微生物研究和教课中应用最广、成效最好的灭菌方法，本实验相同采纳高压蒸汽灭菌。 2． 微生物的分别与纯化。 -1-/12 自然界中各样微生物混淆生活在一同，要研究某种微生物的特征，第一须使该微生物处于纯培育状态。从混淆的微生物集体中获取只含有某一株微 生物的过程称为微生物的分别与纯化。一般是依据微生物对营养、 pH、氧气等要求的不同，供应它们适合的生活条件，或加入某些克制剂造成只利于该菌种生长，不利于其余菌种生长的环境，进而裁减不需要的菌种。 分别微生物常用的方法有稀释平板分别法和划线分别法。本次毕业设计是从中 EPT菌悬液中分别多种有净水功能的菌株，实验将采纳稀释平板分别法利用选择性培育基分别菌种。 3． 分别菌株的判定。 微生物的分类判定是微生物的重要内容，一般从菌落特色、形态、细菌特色及生理生化等方面进行判定。 各样细菌在代谢种类上表现了很大的差别。不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和过氧化氢的能力不同。这些都反应了它们是有不同的酶系统。 细菌的这类生化反响的多样性在自然界产生了两种结果：第一、使自然 界所有的有机分子都有可能获取分解；第二、使不同细菌之间有了相互作用 和相互依靠的基础。另一方面，微生物生化反响是微生物分类判定中的重要 依照之一，细菌的生化反响的多样性也被人们作为细菌的判定和分类方法来 利用，能够鉴识一些在形态和其余方面不易区其余微生物。 三、实验器械 1． 菌种： ETP菌悬液 2． 培育基及培育菌种 [2] ： A 牛肉膏蛋白胨培育基 ---------- ---------------- ETP 菌悬液 B 高氏培育基 ----------------------------------- 放线菌 C 反硝化细菌培育基试管 ------------------------- 反硝化细菌 D 硝化细菌培育基 ------------------------------- 硝化细菌 E MRS培育基 ------------------------------------ 乳酸菌 F 光合细菌培育基 ------------------------------- 光合细菌 -2-/12 G 马铃薯培育基 --------------------------------- 酵母菌 H 淀粉培育基 ----------------------------------- 细菌（生理生化判定） I 牛肉膏蛋白胨斜面培育基 ---------- ------------- 细菌（生理生化判定） J 明胶培育基 ----------------------------------- 细菌（生理生化判定） 3． 溶液和试剂： 配制培育基药品（附表）蒸馏水、 95%乙醇、香柏油、二甲苯、卢戈氏碘液、 5%孔雀绿水溶液、 0.5%番红水溶液，草酸铵结晶紫染液。 4． 仪器和其余用品： 一般光学显微镜， 电子秤，手提式高压灭菌锅 , 超净工作台，无菌培育箱， 4℃ 冰箱。 250mL锥形瓶，无菌培育皿，无菌大小试管，无菌 1mL 移液