大鼠前列腺细胞的制备与培养 .docxVIP

PAGE PAGE 1 大鼠前列腺细胞的制备与培养 前列腺细胞培养的关键是改良培养液的成分，如加入激素样生长因子，可刺激前列腺细胞的生长，同时也能抑制成纤维细胞的生长。 【材料】1．组织来源大鼠（10～20周龄）。2．培养液WAJC 404，介质盐溶液（media salt solution,MSS )，。3．试剂 I型胶原、霍乱毒素、、上皮生长因子（EGF),鼠催乳激素、胰岛素、前列腺上皮细胞生长因子、、、等。4．器皿手术刀、剪、镊子等，水浴箱、离心机、50ml锥形离心管，血细胞计数器，6cm培养皿、24孔培养板，毛吸管、移液器、吸头等。【办法】1．大鼠麻醉致死，全身浸泡于75％中消毒后，于无菌条件下切除所需大鼠前列腺叶，放入6cm平皿中。去除脂肪组织，称重。2．用675 U/ml的胶原酶溶液2ml浸泡（溶剂为MSS液，配制时另加l001U/ml和l00ug/ml）。3．剪碎标本，用毛吸管将剪碎的组织移至25cm2培养瓶内，添加胶原酶，达到1 ml/0.1g组织，在37℃水浴箱内振荡培养；1小时，800r/min离心5分钟，收集细胞。4．用毛吸管将消化所得的上清液吸出，并用金属网（lmm）过滤，除去残渣。将细胞重新悬浮在5 ml含5％胎牛血清的MSS中，依次用253,150,100,41 um尼龙网过滤，每次过滤后都用5 ml含5％的MS