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胶质瘤患者树突状细胞在裸鼠体内外诱导抗肿瘤免疫 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：胶质瘤患者树突状细胞在裸鼠体内外诱导抗肿瘤免疫 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 4 文2：树突状细胞疫苗在人源化裸鼠体内的抗肿瘤免疫保护作用 5 1 材料和方法 5 2 结果 8 3 讨论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 胶质瘤患者树突状细胞在裸鼠体内外诱导抗肿瘤免疫 文1：胶质瘤患者树突状细胞在裸鼠体内外诱导抗肿瘤免疫 【Abstract】 Objective To investigate whether dendritic cells (DCs） obtained from patients with glioma can induce antitumor respoe in vivo and nude mice. Methods DCs were induced by cytokines from the peripheral blood of patients. The antitumor effect of cytotoxic T lymphocytes (CTLs）, stimulated by DCs, was observed in vivo. Then the nude mice were injected with DCs one week before they were attacked by glioma DCs could be induced from the peripheral blood of patients and the CTLs, actived by DCs, could induce effective antitumor respoe in vivo. In Addition, DCs could protect the nude mice and the weight or volume of tumor cut down significantly. Conclusio DCs obtained from patients with glioma can induce effective immune respoe on tumor in vivo and nude mice. 【Key words】 glioma; dendritic cells; nude mouse 胶质瘤是颅内常见的肿瘤之一，其发病率及死亡率逐年上升。近年来的研究表明，树突状细胞（Dendritic cells,DCs）在启动、调节并维持肿瘤免疫反应中发挥重要作用【1～3】。本实验通过观察胶质瘤患者DCs体内外抗肿瘤作用，意欲探索胶质瘤免疫 治疗 新途径。 1 材料与方法 材料 细胞因子（IL-4、GM-CSF）购自Glaco公司；CD86、CD1a、HLA-DR、CD54、CD83McAb购自DAKO公司；外周血来自辽宁省锦州市中心 医院 临床确诊病人；胶质瘤细胞株SK-MG-1购自北京医科大学；SGC-7901人胃癌细胞株、BeL-7402人肝癌细胞株购自中山大学。4周龄BALB/C裸鼠购自北京医科大学。 方法 制备冻融抗原 取107个SK-MG-1胶质瘤细胞，加入1ml生理盐水，反复冻融3次后稀释到10ml，微孔滤膜过滤，4℃保存备用。 制备T细胞及DCs 取患者外周血，Ficoll 不连续密度梯度离心法分离单个核细胞，孵育2h后收集非贴壁细胞作为T细胞备用，贴壁单核细胞用含GM-CSF（1000u/ml）、IL-4（1000u/ml）、15%FCS的完全培养基培养。3天将细胞分为2组：负载组（加入冻融抗原）、未负载组（加入培养基）。7天收集悬浮细胞即为DCs。用CD86、CD1a、HLA-DR、CD54、CD83McAb标记，流式细胞术检测DCs表面分子。 DCs激活T细胞 将T细胞制成1×106细胞/ml悬液，加入24孔培养板(1ml/孔）。DCs经丝裂霉素处理后按1：20加入到培养体系中。72 h后收集细胞即为细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTLs） CTLs杀伤活性试验 于96孔板中分别加入SK-MG-1、BeL-7402、SGC-7901细胞作为靶细胞（5000细胞/孔），按10：1分别加入负载组DCs活化的CTLs、未负载组DCs活化的CTLs、未受DCs活化的单纯T细胞，以加入培养基作阴性对照。37℃、5%CO2培养72h，加入MTT继续培养4h，检测OD值。 裸鼠体内实验 18只