阻断Stathmin基因高表达对成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用.docVIP

阻断Stathmin基因高表达对成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：阻断Stathmin基因高表达对成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 1 1 材料与方法 2 2 结果 3 3 讨论 4 文2：Stathmin基因反义核酸对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 5 0 引言 6 1 材料和方法 7 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 阻断Stathmin基因高表达对成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 文1：阻断Stathmin基因高表达对成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 【Abstract】 Objective To investigate the inhibition of AS-ODN of Stathmin gene on cultured human osteosarcoma cell lines. Methods With SOSP-9607 of human osteosarcoma cell lines of high expression for target cell and AS-ODN for blocking agent, the inhibitory effects of AS-ODN on cultured human osteosarcoma cell lines was observed by using MTT method. The influence of cellproliferation cycle was analyzed with flow The growth of osteosarcoma cells were suppressed by AS-ODN （P）. The action of SOSP-9607 on AS-ODN and the cell division was blocked in metaphase and inducer cell apoptosis. Conclusion The AS-ODN of Stathmin gene may play a crucial role in the growth of osteosarcoma cells, and it might be the new target of treatment for osteosarcoma. 【Key words】 stathmin gene; antisee oligonucleotide （AS-ODN）; osteosarcoma cell lines 成骨肉瘤（osteosarcoma）是人类最常见的原发性恶性骨肿瘤，好发于股骨远端及胫骨近端［1］，死亡率和致残率很高。成骨肉瘤的发生可能为多重染色体畸变的结果［2］，最终导致癌基因激活或抗癌基因失活，两者均导致细胞生长调节控制信号的紊乱。正是由于这些关键性基因的差异表达导致了骨肉留细胞分化的失控。Stathmin（又称为op18、p18、p19、Prosolin及Metablastin）为一种高度保守的细胞内蛋白。Wallon等［3］认为抑制Stathmin的活性对细胞纺锤体形成至关重要，从而起到抑制细胞生长作用，阻断Stathmin的生物学功能有可能成为肿瘤治疗的重要措施之一［4］。本研究用人工合成的互补于Stathmin基因的反义核酸（AS-ODN），阻断Stathmin高表达的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607，探讨对其生长抑制作用，为临床更有效治疗成骨肉瘤提供理论和实验依据。 1 材料与方法 材料 人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607为本研究所建立［5］。反义Stathmin 核酸（AS-ODN）及用于对照的正义S-ODN合成于上海博亚生物技术有限公司，基因序列全硫代修饰：S-OND: 5- ATGGCTTCTTCTGATATCCAGG-3;AS-OND:5- GGATATCAGAAGAAGCCAT-3。台盼蓝为上海化学试剂分装厂分装。紫杉醇由北京益普四环医药公司提供。 方法 MTT试验（测定AS-ODN对SOSP-9607细胞生长的抑制作用） 取对数生长期的SOSP-9607细胞，调节细胞密度为5×104/ml，各取加入96孔板中，分别标记正义组、反义组。正义组和反义组分别加入终浓度均为20μmol/L的S-ODN和AS-ODN。每组设3个复孔，培养后1、2、3、4进行台盼蓝染色细胞计数， 计算 生长抑制率 ［（对照组细胞数-处理组细胞数）/ 对照组细胞数］ 流式细胞仪分析 流式细胞仪（FCM）分析采用Nicolle