基因工程步骤47541培训讲学.ppt

;;一、目的基因的获取;一、目的基因的获取;3、基因文库 　　 又称DNA文库，将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，所有受体菌的集合即为该生物的基因文库。 基因文库由外源DNA片段、载体和宿主组成。 按外源DNA片段的来源分基因文库分为： 基因组DNA文库：包含了某物种的所有的基因 部分基因文库：只包含了部分基因文库（如cDNA文库）;;1）载体DNA片段的制备 DNA分离纯化→限制酶切 2）供体DNA片段的制备 总DNA分离纯化→酶切法→分离特定大小DNA片段 ;①基因组文库的构建 ;② cDNA文库的构建 （反转录法） ;③基因组文库和部分基因文库的比较;思考：怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？;2、利用PCR技术扩增目的基因;① 概念：PCR全称为_______________，是一项在生物_______复制______________的核酸合成技术 ;⑥过程：;PCR的基本反应步骤;3、化学方法人工合成目的基因;从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成;二、基因表达载体的构建—— 核心;;2.基因表达载体的目的 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并可以遗传给下一代 （2）使目的基因能够表达和发挥作用。 ;3、基因表达载体的组成：; 表达载体为什么一定要有启动子？;终止子的作用是什么？ 终止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。;1、原理：;（1）农杆菌转化法;③转化过程:; 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。;（3）花粉通道法;胚珠;2、将目的基因导入动物细胞;微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、 遗传物质相对少;四、目的基因的检测与鉴定;1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因;如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。;（二）鉴定（个体生物学水平）;