厄贝沙坦对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏CTGFp27kip1表达的影响临床医学.docVIP

厄贝沙坦对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏CTGFp27kip1表达的影响临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：厄贝沙坦对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏CTGFp27kip1表达的影响临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏MMP2TIMP2基因表达的影响医学 7 1 材料与方法 8 2 结果 10 3 讨论 11 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 厄贝沙坦对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏CTGFp27kip1表达的影响临床医学 文1：厄贝沙坦对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏CTGFp27kip1表达的影响临床医学 结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)是一种富含半胱氨酸的肝素结合性多肽,含有349个氨基酸,相对分子质量为36 000～38 000，属于即刻早期基因CCN(CTGF、Cyr61、nov)家族成员之一。1991年，bradham等[1]首次在培养的人脐静脉内皮细胞中发现了这种细胞因子,进一步研究发现, CTGF广泛分布于人体各种组织、器官和体液中，具有促进细胞有丝分裂和胞外基质合成、趋化,促进细胞凋亡,调节血管生成等作用，是一个重要的致纤维化因子[2]。我们近期体外细胞培养实验亦证实，CTGF可能介导了AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞肥大。周期素激酶抑制剂p27增多，在高糖培养系膜细胞肥大及糖尿病(DM)肾小球细胞肥大中起重要作用[34]。临床及实验室的结果表明厄贝沙坦(irbsartan，Irb)对糖尿病肾病(DN)有保护作用，可减轻肾脏肥大程度和蛋白尿，保护肾功能[57]，但其确切机制尚不清楚。本研究拟在CTGF和p27水平探讨Irb治疗ＤＮ的作用机制，为防治DN提供一定的理论指导。 1 材料与方法 模型建立和分组将体重为（180±20）g的清洁级雄性SpragueDawley（SD）大鼠[购自 中国 科学 院上海实验动物中心，许可证号为SCXK（沪）]随机分为对照(假手术)组（C组，n=32）、DN组（n=35）和糖尿病血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂Irb治疗组(DNI组，n=39）。每组再随机分为1、2、4 和8周4个亚组，分别于DM成模后1、2、4和8周处死。DN组与DNI组大鼠乙醚麻醉后行右肾切除术,1周后一次性腹腔注射STZ(Sigma公司)(溶于pH 、 mol#12539;L-1枸橼酸枸橼酸钠缓冲液)50 mg#12539;kg-1建立DM模型，Ｃ组大鼠仅给予 mol#12539;L-1枸橼酸枸橼酸钠缓冲液腹腔注射。72 h后大鼠尾静脉采血测血糖,以随机血糖高于 mmol#12539;Ｌ-1作为大鼠DM模型建立标准。模型建立后即给予DNI组大鼠Irb(法国Sanofi公司提供)50 mg#12539;kg-1#12539;d-1灌胃，C组和DN组大鼠给予等量蒸馏水灌胃。实验期间,血糖过高的大鼠皮下注射胰岛素。室温18～20 ℃,湿度69%,12 h交替照明,大鼠自由饮水、进食。 观察指标和测定方法实验开始后每周称体重（BW）,尾静脉采血测外周血血糖(微量血糖仪,SureStep型,美国强生公司)。大鼠在处死前放入代谢笼准确收集大鼠24 ｈ尿量,3000 r#12539;min-1离心10 min,去沉渣,-80 ℃保存,用液相免疫沉淀法测尿微量白蛋白(芬兰,Turbox试剂盒)。宰杀前戊巴比妥钠（30 mg#12539;kg-1）腹腔注射麻醉，称BW，经股静脉采血，离心（3 500 r#12539;min-1,10min）后吸取上清液-80 ℃保存，用HITACH 7150自动生化分析仪检测血、尿肌酐（Cr）。大鼠处死后迅速取出左肾，称肾重（KW）,经肾门冠状面取组织,10%中性甲醛固定,石蜡包埋,切3 μｍ厚片作普通肾脏病 理学 检查,行HE、六氨银染色,4%戊二醛固定液固定后透射电镜观察(JEOL JEM1200EX型) 病理定量分析 HE染色切片,用CMIAS彩色图像处理系统(深圳瑞医科技 发展 有限公司),在400倍视野下每个标本测50个肾小球的直径和面积(AG)，并 计算 肾小球体积(ＶG)=4πｒ3/3(π=,ｒ为肾小球半径)[8]。六氨银染色切片,用CMIAS彩色图像处理系统,在200倍视野下每个标本测200个肾小管面积(AT)。肾组织的免疫组化半定量分析方法为，每个标本在200倍图像的肾皮质区依次选40个视野,染色阳性部位的深浅及范围以平均吸光度表示，p27kip1染色阳性部位及范围以平均阳性细胞核数表示。 CTGF和p27kip1的