β3AR激动剂BRL35135氯沙坦和二甲双胍对肥胖大鼠心肌UCP2mRNA表达的影响临床医学.docVIP

β3AR激动剂BRL35135氯沙坦和二甲双胍对肥胖大鼠心肌UCP2mRNA表达的影响临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：β3AR激动剂BRL35135氯沙坦和二甲双胍对肥胖大鼠心肌UCP2mRNA表达的影响临床医学 1 1 材料与方法 3 2 结 果 4 3 讨 论 6 文2：罗格列酮和二甲双胍治疗新诊2型糖尿病的疗效比较医学 7 1对象和方法 7 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 β3AR激动剂BRL35135氯沙坦和二甲双胍对肥胖大鼠心肌UCP2mRNA表达的影响临床医学 文1：β3AR激动剂BRL35135氯沙坦和二甲双胍对肥胖大鼠心肌UCP2mRNA表达的影响临床医学 在正常细胞代谢和对外部刺激的反应过程中，细胞可产生活性氧，包括氧自由基和过氧化氢（H2 O2 ）等等。低浓度活性氧可促进多种细胞生长、增殖［1］ ;相反，活性氧异常增加导致细胞损伤、死亡［2，3］ 。为了对抗高浓度活性氧的毒性作用，经过漫长的生物进化，需氧生物特别是人类细胞都有一整套抗氧化防御机制，包括过氧化氢酶（catalase，Cat）、超氧化物歧化酶（su-peroxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽（glutathione，Glu）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GPx）、硫代还原物（thioredoxin，Trx）、硫代还原物还原酶（thioredoxin reductase，TR）和过氧化物还原酶（peroxiredoxin，Prx） ［4］ 等等。 Prx是一类新定义的抗氧化物，在生物进化中高度保守，从低等原核生物细菌到高等生物人类，均有Prx表达。迄今，这个家族已有数百个成员。在人类组织细胞中发现了6种Prx ［5］ ，其中，Prx1、Prx2、Prx3和Prx4含有两个保守的以半胱氨酸为中心的活性区域，称为 Prx;而Prx5羧基端半胱氨酸不在保守区域，称为非典型的 Prx;Prx6缺乏羧基端半胱氨酸，称为 Prx。在这些Prx中，Prx1、2和6位于细胞浆内，Prx3特异性位于线粒体内，Prx4为分泌型，Prx5既位于过氧化物酶体，又位于线粒体内。已有资料表明，许多Prx能够降低H2 O2 和其他过氧化物对细胞的损害。Prx1转染能提高人内皮细胞抗H2 O2 毒性作用［6］ ;Prx1或Prx2转染能降低H2 O2 诱导的大鼠甲状腺细胞的凋亡［7］ 。与相应的周围组织比较，胰腺癌［8］ 和间皮瘤［9］ 组织表达Prx1增多;乳腺癌［10］ 、肝细胞癌［11］ 和间皮瘤［9］ 组织表达Prx3增多。本研究将观察Prx1稳定高表达是否影响人PC3前列腺癌细胞对H2 O2 的敏感性。 1 材料与方法 试验材料 限制性内切酶购自NEB公司，四甲基偶氮唑盐（MTT）和抗微管蛋白抗体购自Sigma公司。抗Prx1多克隆抗体和pT7Prx1质粒参见 文献 ［5］ 质粒构建 用限制性内切酶BamHⅠ和XbaⅠ酶切pT7Prx1生成人Prx1cDNA完整开放读码框架（open reading frame，ORF），与经同样酶切的真核表达载体pcDNA3连接，生成质粒。 细胞培养 人PC3前列腺癌细胞（美国ATCC公司）被置于含10%胎牛血清、2mmol#12539;L-1 谷氨酰胺、100kU#12539;L-1 青霉素和100mg#12539;L-1 链霉素的DMEM完全培养基中，37℃、体积分数为的CO2 培养箱中培养。待细胞于2～3d基本融合，用%胰蛋白酶.%EDTA混合液消化，按1∶3～1∶4传代培养。 稳定转染 PC3细胞接种在培养皿中于体积分数为的CO2 中37℃培养16～20h后，以pcDNA3空载体为阴性对照，用lipofectamineTM 2000（Invitrogen）将转染细胞24h。然后1∶10传代，并用400mg#12539;L-1 G418筛选稳定转染细胞。 Western blot分析 用冰冷PBS溶液洗上述稳定转染PC3细胞2遍后，加入RIPA细胞裂解液。收集细胞裂解物，置冰浴孵育10min，然后4℃、14000r#12539;min-1 离心10min，取上清液进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和转膜。分别用抗Prx1抗体和抗微管蛋白抗体及相应的HRP标记的二抗（Ameham）检测Prx1和微管蛋白（作为对照），然后与增强型化学发光底物（Ameham）反应1min。将膜用保鲜膜包好，置暗盒中。在暗室内压上X光片，曝光适当的时间。取出X光片，进行适当的显影和定影，以显示各蛋白条带。 MTT分析 以每孔4×103 密度接种pcD