高效液相色谱法测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸.docVIP

高效液相色谱法测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：高效液相色谱法测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸 1 1 材料与仪器 3 2 方法 3 3 结果 4 4 讨论 5 文2：高效液相色谱法测定健脑补肾丸中绿原酸含量 6 1 仪器与材料 7 2 方法 7 3 结果 8 4 讨论 9 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 高效液相色谱法测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸 文1：高效液相色谱法测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸 Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of chlorogenic acid in callus and suspeion cells of Eucommia ulmoides Oliv. MethodsThe separation was performed on Hypeil C18-ODS (250mm×，5μm) column， using acetonitrile-water-H3PO4 (12∶∶)as mobile phase， detected at 327 nm. The flow rate was ml/min， the column temperature was 25 ℃.ResultsThe linear range of chlorogenic acid was ～ mg/ml， r= 4， the average recovery of chlorogenic acid in casllus and suspeion cells were % and %， D were % and %， respectively. ConclusionThe method is rapid， simple， accurate and stable. Chlorogenic acid content in callus and suspeion cells of Eucommia ulmoides Oliv are mg/g and /g respectively. Key words：Eucommia ulmoides Oliv; Callus; Suspeion cell; Chlorogenic acid; HPLC 杜仲Eucommia ulmoides Oliv为杜仲科杜仲属植物，为我国名贵中药材，具有补肝肾、强筋骨、安胎、降血压之功效［1］。近年来，我国的制药 工业 、保健品生产以及工业材料等方面对杜仲的需求不断增加［2］。人们为了追求短期 经济 效益，无计划人工砍伐开采杜仲资源，加之杜仲生长缓慢， 自然 环境的破坏等原因，杜仲野生资源日趋枯竭，已经不能满足人们的需要。因此除充分利用现有野生杜仲资源外，利用杜仲愈伤组织和细胞的大规模培养来获得高含量药用成分的材料提供给杜仲工业市场已成为一种 发展 趋势。绿原酸是杜仲中一种重要的活性成分， 具有抗菌、抗病毒、保肝、降压等药用功效，2005版《 中国 药典》将其量的高低定为评价杜仲药用价值的主要技术指标之一［3］。利用HPLC法测定杜仲绿原酸的研究已有大量报道［4，5］。为了配合杜仲愈伤组织和细胞培养的研究，本研究建立了测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸的HPLC方法，并利用HPLC法对愈伤组织和由杜仲疏松愈伤组织建立的悬浮细胞系下培养所得的细胞中绿原酸进行了含量测定，从而为利用细胞工程方法生产绿原酸提供一定的实验依据。 1 材料与仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪(配备四元泵，VWD检测器，真空脱气机，柱温箱)，Hpchem工作站，KQ-500DB数控超声清洗器，Sartorius万分之一 电子 天平，μm过滤器，冷冻干燥系统。绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。杜仲愈伤组织按 文献 ［6］方法进行诱导和继代培养，愈伤组织2周继代1次，继代3次后，将愈伤组织取出，真空冷冻干燥后供样品制备用。悬浮细胞是按考献［7］方法筛选所得疏松愈伤组织在本实验室优化所得的液体培养基下，置于摇床中进行悬浮培养所得。培养1周后，将其取出真空冷冻干燥供样品制备用。样品提取所用甲醇为分析纯，HPLC用乙腈、磷酸为色谱纯，水为三蒸水。 2 方法 色谱条件色谱柱Hypeil C18-ODS柱(250 mm× mm，5μm)，流动相为乙腈-水-磷酸溶液(12∶∶)；检测波长为327 nm；流速 ml/min；柱温为25℃；进样量为10μl，采用面积外标法。 对