针刺对运动性失眠大鼠大脑cfos及cjun含量的影响临床医学.doc

针刺对运动性失眠大鼠大脑cfos及cjun含量的影响临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：针刺对运动性失眠大鼠大脑cfos及cjun含量的影响临床医学 1 1 材料 2 2 方法 2 4 分析与讨论 4 文2：电刺激隐神经对大鼠脊髓cfos基因表达的影响临床医学 5 1 材料与方法 7 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 针刺对运动性失眠大鼠大脑cfos及cjun含量的影响临床医学 文1：针刺对运动性失眠大鼠大脑cfos及cjun含量的影响临床医学 睡眠是人类基本的生理需求，良好的睡眠可以促进机体迅速恢复体力和脑力，维持正常的生命节律。大强度的运动负荷对运动员来讲，是一种不良的刺激，运动员在训练和比赛过程中经常会出现失眠现象，称为运动性失眠。它是由运动训练或 体育 竞赛等相关因素所导致的失眠，引起运动员睡眠的时间缩短。又是导致运动性疲劳的主要原因，从而严重影响运动员的训练质量和运动成绩，并对运动员的身心健康造成很大影响。 运动员属于特殊群体，采用不当的治疗手段会对运动员的训练和比赛甚至尿检造成影响，我国传统中医针刺治疗手段具有副作用少，疗效好，整体调理性强的特点。运用传统的中医针刺治疗手段进行疗效研究，以减轻运动后失眠现象对运动员的身心健康的影响，提高运动员的训练和比赛成绩，具有重要意义。本文拟从针刺对大鼠大脑内c-fos和c-jun的表达的影响这两个方面探讨中医针刺疗法治疗失眠的机理。 1 材料 动物采用SPF级别SD大鼠40只，雌性，体重(180±50) g,由南方医科大学动物实验中心提供，将所有大鼠按体重编号，并由SPSS生成随机数字，将所有大鼠分成4组，分别是正常组、对照组、西药组和针刺组，每组10只。置于SPF实验室，自由摄食、饮水。室温22℃。保持 自然 光照，适应性饲养2周，以利环境习服。 药品对氯苯丙氨酸(DL-4-Chlorophenylalanine)，由Sigma公司生产，安定由广州陆军总 医院 购买。实验所需试剂和测试由广州威佳公司提供试剂盒与技术支持;针刺等用品均由广州中医药大学提供。 2 方法 实验过程实验开始第1周，除正常组外，其余3组每只大鼠进行每天15次的Y型迷宫测试，并进行20 min的大鼠跑台(20 m),使其在体力和脑力方面达到疲倦。针刺组头部百会穴处皮下针刺沿督脉方向针刺，1次/d，每次留针20 min，7 d后，最后一次针刺结束后，沿督脉方向，以百会穴为中心，皮下埋羊肠线 cm。对照组予安定灌胃，25 mg/kg，灌胃1周。 1周后，早上8：00开始，将针刺组和对照组大鼠按编号顺序，35 mg/kg腹腔注射对氯苯丙氨酸[1]。并将所有大鼠按分组正常饲养。 48 h后用10%水和氯醛，麻醉后剖开胸腔，经升主动脉快速灌注37℃生理盐水250 ml，然后滴注含4℃ 4%多聚甲醛的磷酸缓冲液300 ml ()，30 min灌流完毕，立即断头取脑，置于上述同样固定液中固定7h，入20%蔗糖液中过夜，在行恒冷箱切片(-20℃) 免疫组化染色 mol/ L PBS中洗10 min，3次，液中漂洗15 min，加5%羊血清封闭，37℃孵育30 min，滴加兔抗多克隆fos抗体和兔抗多克隆jun抗体，37℃ 孵育2 h， mol/ L PBS中洗10 min ，3次,入生物素化羊抗兔IgG (1∶150)孵育1 h (37℃), PBS洗10 min，3次，再入SABC复合物中孵育1h(37 ℃)。PBS洗10 min，3次, DAB显色，重蒸水终止染色10 min,然后脱水、透明、甘油封片。 c-fos和c-jun阳性细胞计数每例脑标本特定部位选取3张切片，定点计数5个高倍视野，在显微镜下(10 ×10倍) ，观察5个视场的阳性细胞。对c-fos和c-jun阳性细胞显微镜下计数，计数相应区域同一视野(海马区)，相同面积内阳性细胞数，取平均值进行统计学分析。 统计分析对所测试指标进行单因素方差分析。主要采用进行。 实验结果表明， 与正常组对比，所有失眠大鼠大脑内的c-fos、c-jun水平均降低(P)，提示c-fos、c-jun可以减轻失眠的发作,对失眠大鼠大脑具有保护作用。针刺能够降低失眠大鼠大脑内c-fos和c-jun水平(P)。针刺可能通过癫痫大鼠大脑内的c-fos和c-jun水平而减轻失眠的发作，对失眠大鼠大脑具有保护作用;与对照西药相比，差别无显著差异(P)，是 治疗 失眠的理想方法。表1 c-fos细胞数(10×10， mm2)与正常组比较，*P;与对照组比较，#P表2 c-jun细胞