支、衣检测与临床意义.ppt

* * 支原体、衣原体的检测与临床 检验科 第一页，共29页。 支原体、衣原体定义 支原体:是一类无细胞壁、呈高度多形态性，能通过滤菌器（0.45um），在人工培养基上能生长的最小原核微生物。 衣原体：是一类能通过滤菌器、专性细胞内寄生、有独特生活周期的原核细胞型微生物。具有NDA和与革兰氏阴性菌类似的细胞壁，对多种广谱抗生素敏感。 第二页，共29页。 支原体、衣原体分类 支原体分类：种类繁多，分布广泛。其对人类致病的主要有肺炎支原体、生殖道支原体、穿透支原体、解脲脲原体和人型支原体。 1981至1996年曾报道发醇支原体、穿透支原体和梨支原体是HIV的协同因子。 衣原体分类：沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、肺炎衣原体和家畜衣原体。 第三页，共29页。 支原体、衣原体检测方法学 支原体检测方法： 1、分离培养法 2、血清学试验 （抗体测定） 3、PCR（只做UU） 4、改良肉汤稀释法（解脲脲原体、人型支原体）优点：价格低且可提供药敏结果，是目前实验室最常用方法。 第四页，共29页。 沙眼衣原体检测方法 沙眼衣原体的检测方法 ： 分离培养法（组织细胞学是诊断金标准）。 聚合酶链反应法（PCR）/连接酶链反应法 （LCR） 直接免疫荧光法（DFA） 酶联免疫吸附试验（ELISA） 血清抗体检测（肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体） 抗原快速免疫层析法（快速法） 第五页，共29页。 目前我实验室沙眼衣原体检测方法 聚合酶链反应法（PCR） 抗原快速免疫层析法（快速法） 酶联免疫吸附试验（ELISA：常用方法） 第六页，共29页。 沙眼衣原体检测方法 细胞培养法 优点：特异性接近100%是沙眼衣原体检测的“金标准”。 缺点：昂贵、费时、要求高，用于研究或确认性试验。 PCR、LCR法 优点：敏感性很高，理论上只要一个原体，可通过扩增而检测出阳性，也适用于无活性标本。 缺点：特异性相对较差，尤其是注意避免外界污染和殘留污染，实验条件和质量控制有严格要求。 第七页，共29页。 沙眼衣原体检测方法 直接免疫荧光法（DFA） 优点：快速、价廉、操作简便。 缺点：结果判断受主观因素影响大，要求较高，在低感染率人群中敏感性差。 抗原快速检测法：是目前基层医院最常用沙眼衣原体检测方法。 优点：操作简便、快速，无需复杂的仪器和设备。 缺点：标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则可能出现漏检，敏感性为30~65%，在试验结果阴性时，不能完全排除感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故。 第八页，共29页。 沙眼衣原体检测方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 优点：敏感性在70~98%，特异性97%,可同时检测大批量样本，结果判断客观性强。 缺点：不适用于单个样本的测定，试验结果阴性时，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故。 第九页，共29页。 支原体、衣原体检测结果与临床关系 1、正确采集标本是保证结果准确性的前提。 2、支原体、衣原体流行病学与临床症状。 3、支原体、衣原体的结果解释与临床治疗。 第十页，共29页。 采集泌尿生殖道标本正确方法 尿道（男性）：清洁尿道口，用男性无菌棉拭子插入尿道2-4cm，转动3-5秒轻轻旋转后取出放置在干燥试管中送检，标本收集前被检测者至少一小时不排尿。 宫颈管（女性）：清除阴道及宫颈口分泌物，无菌拭子插入宫颈管内1-2cm，轻轻旋转后取出，不可碰阴道壁。 精液、羊水、前列腺液：由专科医生取样，无菌洁净溶器盛装送检。 第十一页，共29页。 采集泌尿道生殖道标本注意事项 因支原体对细胞表面有很强亲和力，衣原体又是一种严格细胞内寄生的微生物，易感染柱状上皮细胞，应尽量多采集细胞，所以宫颈标本的采集应在宫颈口或移行处进行，在患处采用拭子或刮片获取。 拭子进入宫颈或尿道后须停留数秒并旋转刮取上皮细胞后再取出。 阴道及宫颈口分泌物支原体、衣原体含量低，杂菌多，真菌较多，容易污染不可取。 脓性分泌物由于缺少感染的上皮细胞不适用于此项检测，应该在对患处进行清洗后采取标本。 第十二页，共29页。 采集泌尿道生殖道标本注意事项 要与PCR标本区别，月经期、先兆流产妇女禁用；阴道用药或灌洗后禁用。 由于抗原快速检测方法需要抗原量较大，请使用第一支拭子采集标本，否则可能导致假阴性结果。 尽量使用绦棉或腈纶拭子，棉花中带有抑制衣原体的成分，且棉花吸水性强，使用后标本量往往达不到试验要求。 标本采集后应尽快送检，4℃放置不宜超过24h， 第十三页，共29页。 支原体、衣原体检测结果与临床关系 1、正确采集标本是保证结果准确性的前提。 2、支原体、衣原体的临床症状。 3、支原体、衣原体的结果解释与临床治疗。 第十四页，共29页。 支原体感染临床症状与传播方式 支原体因