实验甘油三酯测定.pptxVIP

第1页 化学法测定血清甘油三酯 温州医科大学附属第二医院 杜兵 第2页 【血清TG测定方法概述】 物理化学法：同位素稀释-质谱法，决定性方法。 化学法用有机溶剂抽提标本中的TG，去除标本中的磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG为甘油，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测定甲醛。其中比较准确的是变色酸显色法（Van-Handel法），比较简便的是乙酰丙酮显色法。 酶法始于20世纪70年代初，80年代开始普及全酶法。曾经应用过偶联丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶的紫外分光光度法，甘油脱氢酶法，磷酸甘油氧化酶法，甘油磷酸脱氢酶法等多种。以GPO-PAP法较为常用 第3页 化学法基本操作分4个步骤： 1．抽提 2．皂化 3．氧化 4. 显色 第4页 1.抽提 抽提的关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。 用正壬烷、异丙醇和稀硫酸混合溶剂选择性提取甘油三酯。抽提后，下层异丙醇中主要是化学极性大的磷脂和游离甘油，上层正壬烷中主要是甘油三酯，约占总量的99％。正壬烷可以用正庚烷代替。 2.皂化 甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用KOH作皂化剂，温度一般控制在50～60℃，时间为5～15min。水解不完会影响测定结果。 第5页 3.氧化 过碘酸在酸性溶液中将甘油