ELISA原理、方法、操作及注意事项.pptVIP

在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成?夹心复合物。类同于沉淀反响中抗原过剩的后带现象，此时反响后显色的吸光值〔位于抗原过剩带上〕与标准曲线〔位于抗体过剩带 上〕某一抗原浓度的吸光值一样，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应〔hook effect〕，因为标准曲线到达顶峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反响甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂 测定标本中含量可异常增高的物质〔例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等〕时，应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克 隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。  精品 精选文档 在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有一样的a决定簇的反响性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。  精品 精选文档 双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子〔?RF〕的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有R F，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反响。采用F〔ab〕或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标。