常用的组织固定液及配制.pdfVIP

常用固定液及其配制 固定液分单纯固定液和混合固定液。 1 甲醛（ formaldehyde ） 是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是 37 ％～ 40 ％ 得甲醛溶液，商品名为福尔马林（ formalin ）。用作固定的浓度习惯为 10％福尔马林（即 1 份甲醛溶液加 9 份水配制而成） ，实际含甲醛 4 ％。 10％福尔马林渗透力强， 固定均匀， 对组织收缩少。 对脂肪、 神经及髓鞘、 糖等固定效果好， 是最常用的固定剂。 经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。 2 乙醇 无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。固定用 一般是 80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水， 因此核的着色不良。 3 中性甲醛液（混合固定液） 甲醛 （浓）120ml ，加蒸馏水 880ml, 磷酸二氢钠 （NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳 （Na2HPO4） 13g。此液固定效果比单纯 10％福尔马林要好。 4 AF 液（混合固定液） 95 ％乙醇 90ml ，甲醛(浓 )10ml 。也有配方是 95 ％乙醇 85ml ，甲醛 （浓）10ml ，冰醋酸 5ml 。 此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入 95 ％乙醇脱水。 以上 4 种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为 10％福尔马林，乙醇应尽量不用。 yzbai wrote: （1 ）10% 甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。对组织膨胀约 5% ，经酒精脱水时有较大的 收缩。 能保存脂肪， 不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性， 不利 于染色，特别是细胞核的着色。经自来水冲洗 6~24 小时后，可以使其酸碱中和，并减少结 晶。 （2 ）4% 多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对 脂肪和各种酶的固定效果更好。固定的时间不宜太长，以 24 小时以内为宜，适用于免疫组 织化学染色。 几种细胞固定方法 选择最佳固定液标准是： （1）最好地保持细胞和组织的形态结构； （2 ）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术 中是禁用的； （3 ）不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液， 会使上皮细胞产生非特异性荧光； （4 ）固定剂的选择、固定时间、温度和 PH 值都会影响实验结果。 单纯固定液 （1）4%中性甲醛固定液： 最常用的固定液， 能满足常规 HE及免疫组化、 PCR等工作 （Job）。 中性甲醛是以 PH7.2-7.4 的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均 优于一般的 4% 甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个 月。 甲醛（ 40%） 100ml 无水磷酸氢二钠 6.5g 磷酸二氢钠 4.0g 蒸馏水 900ml （2 ）乙醇固定液：使用时以 80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织 渗透力较弱， 因此很少单独使用， 但其保存组织中的核酸强于中性甲醛， 故常用于有核酸操 作的实验或检查，假如用于证实尿酸结晶和保存糖原，可用于 100%乙醇固定组织。 （3 ）4%多聚甲醛固定液：主要用于培养细胞的固定。 混合固定液 （1）乙醇 - 甲醛（乙醇 -福尔马林， AF）固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固 定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入 95% 乙醇脱水。 甲醛（ 40%） 100ml 95%乙醇 900ml （2 ）