实验五植物组织中SOD活性测定.docx

实验五 SOD 活性的测定 一、实验目的 学习并掌握氮蓝四唑（ NBT ）法测定植物体内超氧化物歧化酶（ SOD ）活性 的 基本原理和操作方法。 二、实验原理 超氧物歧化酶（ superoxidedismutase SOD ）普遍存在于动、植物体内，是 一 种清除超氧阴离子自由基的酶。测定 SOD 活性的方法很多，简便且常用的是 （氮蓝四唑 ） 光还原法。该方法的原理是超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑 ） 在光下的还原作用来确定酶活性大小。当反应体系中有可被氧化的物质存在时， NBT （NBT 核 黄素可被光还原， 被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生氧气， 氧气 被 单电子还原产生氧自由基， 氧自由基则可将氮蓝四唑还原为蓝色的化合物， 后 者 在 560nm 处有最大吸收。而 SOD 可清除氧自由基，当反应体系中有 SOD 存 在时 可抑制 NBT 的还原，于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈 低，反之 酶活性愈高。因此可通过测定 A560 来计算 SOD 的活性，以抑制 NBT 光还原反应 50% 所需的酶量为一个酶活性单位。 三、实验材