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对柱型研究和发展的影响 A=0? Golay1957年提出毛细管柱的概念（opentube） 毛细管柱A=0，H=B/u+Cu H↓，N↑，分离能力大大提高 第六十二页，共129页 对柱型研究和发展的影响 B=0? 溶质在液体中的扩散系数DL≈10-5cm2/s 溶质在气体中的扩散系数Dg≈10-1cm2/s DL 《 Dg 当采用液体作流动相时 B→0 液体作流动相时可用更细的固定相，A ↓ HPLC柱效比GC要高2~3个数量级 第六十三页，共129页 操作条件对柱效的影响 第六十四页，共129页 载气线速度（流速）的影响 最佳流速：u=(B/C)1/2 实用最佳流速：比最佳流速更快 A与流速无关 B/u：当流速小时，对H的大小起主导作用 Cu：当流速大时，对H的大小起主导作用 第六十五页，共129页 容量因子k的影响 不同组分k不同，测出的柱效不同 在气相传质阻力相中，k↑ ，Cg↑ 理论上说k越小柱效越高，实际不可取 在液相传质阻力相中，k ↑ ，Cl先↑， 后↓当k=1时，最大。 希望k在一个合适的范围内，通过改变柱温，固定相，柱型参数等可实现。 第六十六页，共129页 柱温的影响 间接影响、十分复杂 对k影响，对扩散系数影响，从而对柱效产生影响，但影响情况难以判断 第六十七页，共129页 对色谱柱的填充提供理论指导 柱径：根据速率方程，柱径越小，柱效越高，但柱径越小，固定相越难填充均匀。 柱长L：柱长增加，总塔板数增加，但柱长增加，分离时间将增加。 固定相粒径dp：根据速率方程，粒径减小，A项减小，C项减小，柱效增加。但粒径太小，不易填充，同时A项增大。 第六十八页，共129页 对色谱柱的填充提供理论指导 液膜厚度df：从柱效角度考虑，液膜越薄，柱效越高（根据速率方程），但允许的进样量减小。固定液与担体的配比一般在5:100-25:100之间，但现在更低配比的固定相也应用广泛。 更重要的是：不同沸点的物质，应采用不同配比的固定相。 第六十九页，共129页 影响谱带扩张的其他因素 非线性分配色谱 载体表面活性吸附中心造成的拖尾 柱外效应 色谱柱外引起色谱峰扩展的因素：如进样系统及进样方式、系统连接管、检测器死体积，检测器响应时间常数等因素引起的谱带宽展。 第七十页，共129页 速率理论方程式的偶合式 H=(1/A+1/Cgu)-1+B/u+Clu A’= (1/A+1/Cgu)-1为偶合项 已被普遍接受 第七十一页，共129页 第七十二页，共129页 2. 色谱分离基本方程 对于常规分析工作，一般选用： 选择性系数α（相对保留值）与保留指数I来评价固定液 有效塔板数N有效来评价色谱柱与分离条件 以分离度R作为柱的总分离效能指标 第七十三页，共129页 （1）几个概念——选择性系数α 定义与相对保留值(ri,s)基本相同 不同之处在于选择性系数是两个相邻峰的调整保留值之比（后峰比前峰，α≥1），而不是被测物与标准物质的调整保留值之比（可小于1） 它是评价固定液选择性的指标。选择性系数越大，该柱对此相邻峰的分离越好。 第七十四页，共129页 几个概念——有效塔板数N有效 在气相色谱中，通常用有效塔板数N有效和有效塔板高度H有效来评价柱子的分离效能，它扣除了死体积对分离的影响，更好地反映了柱子的实际分离效能。 柱效越高，该柱的分离能力越好。 第七十五页，共129页 几个概念——分离度R R越大，说明两组分分离得越好。 由于该定义综合了色谱动力学和热力学因素，可作为色谱柱的总分离效能指标。 第七十六页，共129页 (2)色谱分离基本方程（Purnell方程） 公式推导 第七十七页，共129页 第七十八页，共129页 （3）色谱分离基本方程的启示 要改善物质对的分离（提高R），即提高两相邻物质的分离度，可以采取以下措施： 提高柱效N 提高选择性系数α 增大容量因子k 第七十九页，共129页 N的影响，如何提高N？ 分离度R与理论塔板数N的平方根成正比关系，增加塔板数，有利于提高分离度。 增加柱长可增加N，改善分离，但分析时间将大大延长，峰产生扩展。 减小塔板高度H： 根据速率方程的启示制备一根性能优良的色谱柱是十分重要的。 根据速率方程选择合适的色谱条件同样有效。 第八十页，共129页 K的影响，如何改变k？ 分离度与容量因子有关，容量因子越大，分离越好。 k 1 3 5 7 9 11 13 ∞ k/k+1 0.50 0.75 0.83 0.88 0.90 0.92 0.93 1.00 但当容量因子大于10，k/(k+1)的改变不大，而分析时间将大大延长。因此，k的最佳范围是1k1