土壤中分解尿素的细菌的分离和计数上课用.pptx

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数上课用会计学第2页/共37页3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。4、课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一.研究思路㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照㈠.筛选菌株第3页/共37页 1、实例： DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶（930C）。 问：如果请你寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找？启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。第4页/共37页 水生耐热细菌Taq：美国科学家布鲁克于1966年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现，并分离出耐高温的TaqDNA聚合酶。问：为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来？第5页/共37页 原因：因为热泉温度70～800C，高温淘汰了绝大多数微生物（不耐热），只有Taq细菌被筛选出来。【研究思路】 （一）筛选菌株原理：有选择作用人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。第6页/共37页2、实验室中微生物的筛选原理： 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；配置合适的培养基方法： ⑴抑制大多数微生物生长 ⑵造成有利于该菌生长的环境，结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4`7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g第7页/共37页3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？固体培养基选择培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素第8页/共37页4、该培养基如何将分解尿素的细菌选择出来？ 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能利用尿素作为氮源而生存。 缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。第9页/共37页对设计实验的训练组别培养基类型是否涂布接种目 的实验组以尿素为唯一氮源的选择性培养基是对照组牛肉膏蛋白胨培养基是分离尿素细菌用以判断选择性培养基是否具有选择性第10页/共37页 对照组牛肉膏蛋白胨培养基 实验组以尿素为氮源的培养基第11页/共37页【统计菌落数目】常用方法：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法， 还可以用过滤膜法1、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。1个菌落 = 1个活菌 第12页/共37页稀释涂布平板法。 （2）操作方法：稀释涂布平板 → 统计菌落数。（3）统计原则 ①、选 30—300 个菌落的平板统计。 ②、每个稀释度取3个平板取其平均值。（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数来表示。第13页/共37页统计菌落数目 P22同学平板1平板2平板3平均数评价甲230230乙21212256163结论启示没有设置重复组，因此结果不具说服力。1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误。不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。第14页/共37页注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。第15页/共37页（三）设置对照 在做本课题的实验时，A 同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落。但是，其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。 其他同学认为A同学的结果有问题。他们分析可能是A同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。 但是，A同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。但