试验二质粒dna电泳鉴定武汉大学药学院.pptxVIP

会计学;实验原理及背景知识简介;琼脂糖凝胶电泳;分离原理;DNA分子在高于等电点的PH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定电场强度下，DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数成反比。;DNA电泳影响因素（一）;DNA电泳影响因素（二）;电泳缓冲液??目前有3种缓冲液适用于天然双链DNA的电泳：TAE、TBE和TPE，其组成及特点见表2.2。一般常用的DNA电泳选用TAE较多，其电泳时间较快，而且成本比较低，但是其缓冲容量较低，需经常更换电泳液。 ;琼脂糖凝胶电泳中常用的缓冲液;电泳指示剂溴酚兰在碱性液体中呈紫兰色，一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成上样缓冲液。 作用： ①增加样品比重，以确保DNA均匀沉入加样孔内。 ②形成肉眼可见的指示带，预测核酸电泳的速度和位置。 ③使样品呈色，使加样操作更方便。 ;溴化乙锭（EB） 是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。其荧光强度与DNA的含量成正比。据此可粗略估计样品DNA浓度。 琼脂糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，其DNA量一般5ng。;实验材料及器材;微波炉 ——溶胶用;凝胶电泳仪及电泳槽;凝胶成像系统;实验准备工作;实验步骤——（一）制胶;;实验步骤——（二）点样;;实验步骤——（三）电泳分离及结果观察;;第23页/共27页;DNA电泳图谱;注意事项;思 考;感谢您的观看！