生物化学课件：第一篇核酸化学.ppt

分子杂交（Hybridization) 两条来源不同但有核苷酸互补关系的DNA单链分子或DNA单链与RNA分子，在去掉变性条件后，互补的区段能够退火复性形成双链DNA分子或DNA/RNA异质分子，这一过程称为核酸的分子杂交。 4.3.4 核酸的理化性质—分子杂交 基因：能够指导合成有功能的多肽或RNA的一段DNA序列。 所有生物细胞都含有DNA和RNA这两类核酸。 原核细胞DNA集中在拟核。 真核细胞DNA分布在核内，与蛋白质组成染色体（染色质）。线粒体、叶绿体等细胞器也含有DNA。 病毒或只含DNA，或只含RNA，从未发现两者兼有的病毒。 原核生物DNA、质粒DNA、真核生物细胞器DNA都是环状双链DNA。 所谓质粒是指拟核DNA外基因，它能够自主复制，并表现出特定的性状。 真核生物染色体DNA是线型双链DNA。病毒DNA种类很多，结构各异。 动物病毒DNA通常是环状双链或线型双链。 植物病毒基因组大多是RNA，DNA较少见。 少数植物病毒DNA或是环状双链，或是环状单链。 噬菌体DNA多数是线型双链，也有为环状双链的。 rRNA呈单链存在，也有局部双螺旋和发夹结构,rRNA 与蛋白质一起组成核糖体，作为蛋白质合成场所； 核酶 4.2.4.2 rRNA的分子结构 原核 70S 真核 80S 大亚基 50S(23S,5S) 32种蛋白质 60S(28S,5S,5.8S) 小亚基 30S(16S) 21种蛋白质 40S(18S) 30种蛋白质 真核、原核的核糖体比较 4.2.4.3 mRNA的分子结构 mRNA是以DNA为模板合成的，携带着DNA的遗传信息，因此称为信使RNA。 mRNA是蛋白质合成的模板，决定着蛋白质中氨基酸的顺序 S-D序列、帽子与尾巴结构 帽子结构 m7G-5’ppp5’-N PolyA 位点 原核与真核细胞的mRNA在结构上的差异： 1. 原核细胞mRNA是多顺反子，真核细胞mRNA为单顺反子。 顺反子：是顺反试验所规定的遗传单位，相当于一种多肽链的编码基因。一个基因就是一个顺反子。 2. 原核生物mRNA分子中一般没有修饰成 分，而真核生物mRNA一般都有修饰成分 3. 绝大多数真核细胞的mRNA的3’-末端有一段polyA，5’-末端有一“帽子”结构 猜想： “帽子结构”与polyA有什么作用？ 4. “帽子”结构可能与蛋白质合成的正确起始作用；抗核酸外切酶降解及协同核糖体与mRNA相结合有关， 3′-末端的polyA是mRNA与核孔识别的信号，有助于其通过核孔；抗核酸外切酶降解的作用 4.3.1 核酸的理化性质—物理（了解） 溶解度：DNA,RNA均微溶于水，不溶于 乙醇、乙醚等有机溶剂。 2.酸碱解：DNA 抗碱性比RNA 强，二者均 不耐强酸、强碱。 3.沉降特性：RNA环形DNA蛋白质 RNA---蔗糖梯度超离心 DNA---氯化铯梯度超离心 4.粘度： 线性〉无规则线团〉球形 5.*紫外吸收：嘌呤碱与嘧啶碱有共轭双键，因此有紫外吸收，最大值在260nm 左右 如何利用? 紫外线杀菌 紫外光子的能量被DNA中的碱基对吸收，引起遗传物质发生变异，使细菌当即死亡或不能繁殖后代，达到杀菌的目的 核酸的变性（denaturation): 指核酸的双螺旋区的氢键断裂，双螺旋解开，变成无规则卷曲的过程。并不涉及共价键的断裂。 变性因素：加热、酸碱、尿素 4.3.2 核酸的理化性质—变性** 试想： 变性后，核酸链的紫外吸收有何改变？ 变性的特点： 1. 增色效应：与天然DNA相比，变性DNA因其双螺旋结构被破坏，使碱基充分暴露，因此紫外吸收增加，这种现象叫…. 2. 粘度下降 3. 浮力升高 4. 失去部分或全部活力 熔点/熔解温度（melting temperture) 通常把增色效应达到一半时的温度或DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA的……，用Tm表示 与Tm相关的因素 1. DNA的均一性 2. G-C含量 3. 介质离子强度 强度高， Tm高 核酸的降解 指多核苷酸骨架上共价键的断裂 (3’,5’—磷酸二酯键)  RNA有局部的双螺旋，因此也可变性 RNA能否变性？ 复性（Renaturation) 变性DNA在适当条件下，又可使两条 彼此分开的链重新缔合成为双螺旋， 这个过程称为….. 4.3.3 核酸的理化性质—复性** 退火： 热变性的