紫外可见分光法.ppt

第十章 紫外-可见分光光度法;;想一想;;物质的颜色与光的关系;物质对光的汲取与汲取光谱; 在紫外可见光区范围内， 有机化合物的汲取光谱主要有 σ→ σX、 π→ πX、 n → σX、 n→ πX及电荷迁移跃迁。 无机化合物的汲取光谱主要由电荷迁移跃迁和配位场跃迁。;二、汲取光谱曲线〔汲取曲线〕;吸收峰;定性分析与定量分析的根底;三、紫外-可见分光光度法的特点;四、 光的汲取定律—朗伯－比尔定律; 溶液对光的汲取除与溶液本性有关外，还与入射光波长、溶液浓度、液层厚度???温度等因素有关。;1．Lamber-Beer定律的适用条件〔前提〕 入射光为单色光 溶液是稀溶液 2．该定律适用于固体、液体和气体样品 3．在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 应用：多组分测定;(三)吸光系数 Absorptivity;? 与物质的本性、溶剂和入射光的波长有关，即： ;解：; 定量分析时，通常液层厚度是相同的，按照比尔定律，浓度与吸光度之间的关系应该是一条通过直角坐标原点的直线。但在实际工作中，往往会偏离线性而发生弯曲。;〔一〕光学因素;〔二〕化学因素;误差X：入射光源不稳定 汲取池玻璃的厚度不均匀 池壁不平行，外表有水迹，油污或划痕 光电池不灵敏，光电流测量不精确 误差影响：透光度读数误差;测量条件的选择 ;2. 读数范围的选择; 因此，为了减小测量误差，通常通过操作溶液浓度或选择比色皿的规格，将吸光度操作在0.2～0.7范围内。;汲取定律〔标准曲线〕与汲取光谱的区别 ;;紫外-可见分光光度计组件; 二、紫外-可见分光光度计的光学性能 1．测光方法 2．波长范围 3．狭缝或光谱带宽 4．杂散光 5．波长精确度 6．吸光度范围 7．波长重复性 8．测光精确度 9．光度重复性 10．分辩率 ; 三、紫外-可见分光光度计的类型 1.可见分光光度计 721型 ; 三、紫外-可见分光光度计的类型 1.可见分光光度计 722型 ;三、紫外-可见分光光度计的类型 2.紫外-可见分光光度计 单光束分光光度计 双光束分光光度计 双波长分光光度计 ;三种分光光度计的构造简易图对比; 第三节 紫外可见分光光度分析方法;〔一〕定性鉴别;1．比照汲取光谱的特征值;2．比照吸光度或吸光系数的比值：;3．比照汲取光谱的一致性;注： 在相同的实验条件〔仪器条件、溶剂〕下，将未知物的紫外光谱与标准物质的紫外光谱进行比较，假设两者谱图相同，可认为含有相同的生色团，但不肯定是相同的物质。;〔二〕纯度检测 绘制汲取曲线，看是否有杂质峰。 如：乙醇中含有苯，汲取曲线在256nm处有苯的汲取峰，乙醇在紫外可见光区无明显汲取。;2．杂质的限量测定：;二、定量分析; 在没有标准品可供比较测定的条件下，按文献规定条件测定被测物的吸光度，从样品的配制浓度、测定的吸光度及文献查出的吸光系数即可计算样品的含量。 ;例：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414，求该溶液的浓度;例：周密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。周密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的汲取池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？;2．标准曲线法;标 准 曲 线 法 ;3．标准品对比法：;例： 维生素B12的含量测定 周密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对比液，周密称定对比品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm汲取池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液的浓度〔μg/mL〕;〔二〕多组分的定量方法;2．两组分汲取光谱局部重叠 λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Cb ;3．两组分汲取光谱完全重叠——混合样品测定;1．解线性方程组法;2．等汲取双波长法;在?2， A?2 = Ax2+Ay2 在?1， A?1= Ax1+Ay1;; 选择性好 所用的显色剂仅与被测组分显色而与其它共存组分不显色，或其它组分干扰少。 灵敏度足够高 有色化合物有大的摩尔吸光系数，一般应有104~105数量级。 有色配合物的组成要恒定 显色剂与被测物质的反响要定量进行。 生成的有色配合