茶叶生物技术PPT课件（共7单元）04第三章茶叶酶工程.pptVIP

乙酰 -DL — Ala L — Ala +乙酸 乙酰 -D — Ala Aminoacylase 氨 基 酰 化 酶 八、固定化酶的应用 世界上第一种工业化生产的固定化酶。1969年，日本田边制药公司将从米曲霉中提取分离得到的氨基酰化酶，用DEAE-葡聚糖凝胶为载体通过离子键结合法制成固定化酶，将L-乙酰氨基酸水解生成L-氨基酸，用来拆分DL-乙酰氨基酸，连续生产L-氨基酸。剩余的D-乙酰氨基酸经过消旋化，生成DL-乙酰氨基酸，再进行拆分。生产成本仅为用游离酶生产成本的60％左右。 泵 储 罐 反应产物 离心机 消旋反应器 固定化酶柱子 晶体 L-Ala L-Ala A-D-Ala A-L-Ala A-D-Ala 高果糖浆 也称果葡糖浆或异构糖浆，它是以酶法糖化淀粉所得的糖化液，经葡萄糖异构酶的异构作用，将其中一部分葡萄糖异构成果糖，由葡萄糖和果糖而组成的一种混合糖糖浆。 高果糖浆的生产 世界上生产规模最大的一种固定化酶。将培养好的含葡萄糖异构酶的放线菌细胞用60～65℃热处理15min，该酶就固定在菌体上，制成固定化酶，催化葡萄糖异构化生成果糖，用于连续生产果葡糖浆。 固定化酶法生产高果糖浆 青霉素酰化酶转化流程图 酶电极 酶电极是由固定化酶与各种电极密切结合的传感装置。1962年Clark和Lyons提出模型，1967年Updike和Hicks首先制造出酶电极并把它用于葡萄糖的定量分析。 酶电极一般可根据电极检测物理量的不同分为电流型和电压型，前者一般有氧电极、H2O2电极等，后者有NH3、CO2、H2电极等。 较典型的一种酶电极为葡萄糖酶电极。 葡萄糖＋醌＋H2O 葡萄糖酸＋氢醌 葡萄糖氧化酶 氢醌 醌＋2H＋＋2e－ Pt 铂电极 葡萄糖酶电极结构示意图 葡萄糖酶电极的敏感膜是葡萄糖氧化酶（GOD），它被固定在聚乙烯酰胺凝胶上。在酶膜的作用下葡萄糖发生氧化反应，消耗掉氧而生成葡萄糖酸和过氧化氢。通过用电极测量被消耗的氧或生成的过氧化氢就可了解葡萄糖浓度。 脲电极 Urea + 2H2O 2NH4++2HCO3- 脲酶 产生的2NH4+为阳离子电极感应。 此外还有： 氨基酸电极 醇电极 尿酸电极 乳酸电极 青霉素电极 亚硝酸离子电极：菠菜亚硝酸还原酶产生NH3 一些常见的酶电极 底 物 酶 电 极 5′－腺苷酸 5′－腺苷酸脱氨酶 NH4+ 乙醇，醇 乙醇脱氢酶 Pt 过氧化物 过氧化氢酶 Pt (O2) 磷酸葡萄 硫酸酯酶+葡萄糖氧化酶 Pt (O2) D-氨基酸 D－氨基酸氧化酶 NH4+ L-氨基酸 L－氨基酸氧化酶 NH3 蔗糖 蔗糖酶+葡萄糖氧化酶 Pt (H2O2) 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 Pt (O2) 硫酸酯 芳基硫酸酯酶 Pt 硫氰酸 硫氰酸酶 CN－ 硝酸盐 硝酸盐还原酶/ 亚硝酸盐还原酶 NH4+ 亚硝酸盐 亚硝酸盐还原酶 NH3（气体） 草酸 草酸脱羧酶 CO2（气体） 青霉素 青霉素酶 pH 乳酸 乳酸脱氢酶；细胞色素b Pt，Fe（CN）-4 L－氨基酸 脱羧酶 CO2 L－精氨酸 精氨酸酶 NH4+ L－天冬酰胺 天冬酰胺酶 NH4+ 柱式酶反应器工作原理示意图 作业 概念：固定化酶 酶固定化的意义 酶的固定化方法 九、固定化细胞 将细胞限制或定位于特定空间位置的方法称为细胞固定化技术。被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞。 特点： 1.无需进行酶的分离和纯化。 2.细胞本身含有多酶体系，可催化一系列反应。 3.?酶的辅助因子可以再生，稳定性高。 4.?保持酶的原始状态，酶的回收率高。 5.?抗污染能力强。 制备方法：与固定化酶相同，有包埋法、载体结合法 、交联法、热处理法、射线处理法。 其中包埋法是最理想的方法。 包埋法 1 原理 在菌体细胞本身不发生化学反应的情况下，将其 包进半透性的多聚物膜内。小分子的底物和产物均可 自由出入，而菌体细胞却不会漏出。 2 方法 常用的包埋材料是：聚丙烯酰胺凝胶、明胶、琼脂 以制备含天门冬氨酸的大肠杆菌细胞为例 将菌体细胞预先用生理盐水悬浮，向悬浮液中加入聚丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺，然后加入催化剂过硫酸胺和加速剂四甲基乙二胺，混匀后放置一定时间聚合。将得到的凝胶破碎即得到固定化细胞。收率达72.5％。 包埋法制备固定化菌体应用举例 包埋材料 菌种 酶系 用途 琼脂 大肠杆菌 大肠杆菌 谷氨酸脱羧酶 青霉素酰胺酶 制造γ-酪蛋白 生产6-氨基青霉烷酸(6-APA) 明胶－戊二醛 短乳杆菌 链霉菌 葡萄糖异构酶 从葡萄糖生产高