实验九用正交法测定几种因素对蔗糖.pptVIP

* * 实验九用正交法测定几种因素对蔗糖 第1页，共14页，编辑于2022年，星期六 实验原理 酶的催化作用是在一定条件下进行的，它受多种因素的影响，如：底物浓度、酶浓度、溶液的pH值和离子浓度、温度、抑制剂和激活剂等都能影响催化反应的速度。通常是在其他因素恒定的条件下，通过对某因素在一系列变化条件下的酶活性测定，求得该因素对酶活力的影响，这是单因素的简单比较法。 本实验用正交法测定温度、pH值、底物浓度和酶浓度四种因素对蔗糖酶活性的影响，这是多因素（≥3）的实验方法。 第2页，共14页，编辑于2022年，星期六 正交法是通过正交表安排多因素实验，利用统计数学原理进行数据 分析的一种科学方法，它符合“以尽量少的试验，获得足够的、有效的信 息”的实验设计原则。正交试验法的程序为下列八个步骤： （1）确定试验目的。实验目的是多种多样的，如找出产品质量指标的最佳组合、确定最佳工艺条件等。本实验的目的是为了提高酶的反应速度，提高酶的活力。 （2）选择质量特性指标。应选择能提高或改进的质量特性及因素效应。对于本实验来说就是产物（葡萄糖）生成量的多少。 （3）选定相关因素。即选择和确定可能对实验结果或质量特性值有影响的那些因素，可人为控制与调节的因素，如温度、pH等。这些因素之间有相互独立性。 （4）确定水平。水平，又称位级，是因素的一个给定值或一种特定的措施，或一种特定的状态。水平也就是因素变化的各种状态。在确定水平时，应考虑选择范围、水平数和水平位置。如本实验的温度水平可以选择20℃、30 ℃、50 ℃三个水平。 第3页，共14页，编辑于2022年，星期六 （5）选用正交表。应从因素数、水平数以及有无重点因素需要强化考察等各方面综合考虑选用正交表。一般情况下，首先根据水平数选用2或3系列表，然后，以容纳试验因素数，选用实验次数最少的正交表。如有重点考察的因素，则根据其多考察的水平数，选混合型正交表。 （6）配列因素水平，制定实验方案。按随机原则，把因素配列于选用的正交表中，制定实验的顺序、时间等，即制定实验具体方案。 （7）实施实验方案。按实验方案，认真、正确地试验，如实记录各种实验数据。 （8）实验结果分析。对实验中取得的各种数据进行分析。如从数据中直接选出符合或接近质量特性期望值的实验条件组。如不能采用直观分析方法，则应采用其他分析方法，确定各因素主次地位可用极差分析方法，定量分析各个因素对实验结果的影响程度，则用方差分析方法。 第4页，共14页，编辑于2022年，星期六 操作方法 1.实验设计： 1）确定指标：即实验的结果。本实验的指标是酶活力。这里，用A520值表示。 2）制定因素水平表：考察四个因素（温度、pH值、底物浓度和酶浓度），每个因素取三个水平（如温度选择20℃、35 ℃ 和50 ℃ 三个水平）。水平是因素变化的范围（通常是根据专业知识确定。如无资料可借鉴，应先加宽范围再逐步缩小）内要进行实验的具体条件，如表1。 第5页，共14页，编辑于2022年，星期六 表1 因素水平表 因素 水平 A 温度 （℃） B pH值 C 底物浓度 （ml） D 酶浓度 （ml） 1 20 2.5 0.10 0.02 2 35 4.5 0.3 0.06 3 50 6.5 0.6 0.1 Note: 各组可根据自己的设计选择相应因素的水平变化范围 如：温度的选择可为25 ℃、35 ℃、55 ℃。 第6页，共14页，编辑于2022年，星期六 3）选择正交表：可容纳三因素三水平的正交表有L9（34）、L27（313）、L18（36×6）和L27（38×9）。本实验不考察各因素间的交互作用，也没设计混合水平，只有水平数均为3的的四个因素，故选用L9（34）表，见表2。 分析： A. 判断各因素的水平范围是否选偏； B. 判断各因素显著性大小的顺序； C. 判断实验结果的置信度。 4）实验安排:根据因素和各因素的水平条件设计实验。 （见表3） 第7页，共14页，编辑于2022年，星期六 表2 正交表L9（34）（举例） 列号 试验号 1 （温度） 2 （pH） 3 （底物浓度） 4 （酶浓度） 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 第8页，共14页，编辑于2022年，星期六 表3、实验安排（举例） 管号 试剂 1 6 8 2 4 9 3 5 7 蔗糖溶液 Ml 0.1 0.3 0.6 0.1 0.3 0.6 0.1 0.3 0.6 缓冲液pH 体积？