实验三蛋白质的性质实验.pptVIP

第1页，共13页，编辑于2022年，星期六 实验目的 1.加深了解构成蛋白质的基本结构单位（氨基酸） 和主要连接方式（肽键） 2.了解呈色反应原理 3.学习几种常用的鉴别蛋白质和氨基酸的方法 第2页，共13页，编辑于2022年，星期六 # 双缩脲反应 1）原理： 将尿素加热到180℃，则两分子尿素缩合而成一分 子双缩脲，并放出一分子氨。双缩脲在碱性溶液中能 与硫酸铜反应产生红紫色络合物，此反应称双缩脲反 应。（蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽 键，因此也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。通 常可用此反应来定性鉴定蛋白质，也可根据反应产生 的颜色在540nm处比色，定量测定蛋白质）。 第3页，共13页，编辑于2022年，星期六 # 双缩脲反应 2）试剂： （1）尿素 （2）10%氢氧化钠溶液 （3）1%硫酸铜溶液 （4）2%卵清蛋白溶液 2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清：水=1：9） 第4页，共13页，编辑于2022年，星期六 # 双缩脲反应 3）操作： 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使 尿素熔化，然后停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。 冷后，加10%氢氧化化钠溶液10滴，振荡混匀，再加1% 硫酸铜溶液2滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。要避 免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖 粉红色。 向另一试管加卵清蛋白溶液约5滴和10%氢氧化钠溶 液约10滴，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。 观察紫玫瑰色的出现。 第5页，共13页，编辑于2022年，星期六 # 双缩脲反应 4）注意事项： 含有一个肽键和一个-CS-NH2,-CH2-NH2，-CRH-NH2 等基团的物质以及乙二酰二胺等物质也有此反应。因 此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但 有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。 第6页，共13页，编辑于2022年，星期六 # 茚三酮反应 1）原理： 在加热条件下，所有氨基酸及具有游离α-氨基的 肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯 氨酸与茚三酮反应产生黄色物质。此反应十分灵敏，根 据反应所生成的蓝紫色的深浅，进行比色就可测定样品 中氨基酸的含量，也可以在分离氨基酸时作为显色剂对 氨基酸进行定性或定量分析。 第7页，共13页，编辑于2022年，星期六 # 茚三酮反应 2）试剂： （1）2%卵清蛋白 （2）0.5%甘氨酸溶液 （3）0.1%茚三酮-乙醇溶液 第8页，共13页，编辑于2022年，星期六 # 茚三酮反应 3）操作： （1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液5 滴，再各加2滴0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中 加热1-2分钟，观察颜色由粉色变紫色再变蓝。 （2）在一小块滤纸上滴一滴0.5%缬氨酸溶液，风干 后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁 烘干显色，观察紫红色斑点的出现。 第9页，共13页，编辑于2022年，星期六 # 茚三酮反应 4）注意事项： β―丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。因 此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚 三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定 性、定量测定中，应严防干扰物存在。 此反应的适宜pH为5-7，同一浓度的蛋白质或氨基 酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至 不显色。 第10页，共13页，编辑于2022年，星期六