磁珠分选原理及应用.pptxVIP

磁珠分选原理及应用会计学第1页/共48页内容 ? MACS技术原理 ? MACS技术设备及分选策略 ? 几种特殊的MACS分选 分选和分析DC细胞 分选各种T细胞 分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞 分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选MD0197.02第2页/共48页MACS技术原理MACS(Magnetic Activated Cell Sorting)：=免疫学+细胞生物学+磁力学 基于抗体对抗原的特异性识别 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的MD0347.01第3页/共48页MACS? 磁性分选MACS微珠进行磁性标记洗脱阳性分选的细胞未标记的细胞先行流出MD0651.01第4页/共48页分选前标本制备：过滤MACS预选滤器：30?m MD0197.02第5页/共48页MACS 技术 设备与试剂 ? MACS微珠 ? MACS分选柱 ? MACS 分选器 ? 详细分选方案* MD0197.02第6页/共48页MACS技术设备与试剂MACS微珠： MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。 特性： 50nm大小 对细胞没有毒性 可生物降解 不影响细胞特性 第7页/共48页MACS技术分选的CD8+ T 细胞微珠MD0057.03第8页/共48页MACS微珠直标微珠多选微珠间标微珠第9页/共48页MACS技术设备与试剂MACS分选柱： 》填充有不同规格的铁珠。 》铁珠表面有亲水包被，不损伤细胞。 》无菌包装。 》可用于分选多种细胞及亚细胞物质、 细菌、病毒、mRNA和蛋白质。专利产品将磁场扩大1000－10000倍——高纯度，高回收率 第10页/共48页在MS柱中产生的强大磁场 MD0061.02MACS技术设备与试剂第11页/共48页MACS分选柱：第12页/共48页MACS技术设备与试剂MACS分选器：从手动到自动，从实验室到临床MACS技术设备与试剂第13页/共48页MACS分选器第14页/共48页autoMACS分选仪 9种程序，一机完成所有细胞分选 成本低，两个可重复使用的分选柱（2周内100次） 快速（3－10分钟）重复性好 全自动分选，仪器操作简单 适用范围广：从少量标本（105）到大量标本（4X109），进样量0.5ml-50ml 8种全血微珠，可以做常见细胞的全血分选，省去了费时的提取单个核细胞过程第15页/共48页MACS技术主要优势 ? 小磁珠: 50 nm（快速、不活化细胞、不沉淀） ? 保留细胞功能（直接进行后续实验；无毒性；氧化 铁和多聚糖组成，可生物降解） ? 与流式细胞仪兼容（不影响细胞光学特性、不影响荧 光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流 式分选时间） ?快速、简便、无菌 ?适用范围广（磁珠种类多、从少量到大量、适用于分 选各种细胞、亚细胞物质）MD0043.02第16页/共48页MACS? 细胞分选策略 ? 阳性分选 ? 去除分选 ? 去除分选后再阳性分选 ? 多重分选 MD0044.02第17页/共48页MACS细胞分选策略1、阳性分选： ? 根据特异性标志分选细胞: 阳性分选是指目的细胞磁性标记 后，作为阳性的标记组分直接分选出来。? ? 优点： ? 》高纯度，尤其是富集稀有的细胞 》高回收率 》操作简便、迅速 MD0044.02第18页/共48页阳性分选策略MACS? 微珠磁性标记将分选柱移出磁场，洗脱阳性分选细胞未标记细胞先行流出MD016102第19页/共48页MACS细胞分选策略2、去除分选： ? 去除分选是磁性标记非目的细胞，并将其从细胞混合物中去 除，即未磁性标记的细胞为目的细胞。? ? 去除分选策略适用范围： 》去除不需要的细胞 》缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞） 》不需要抗体和目的细胞结合 》需进一步通过阳性选择分选细胞亚群 MD0044.02第20页/共48页去除分选磁性标记分选未磁性标记细胞MD0160.02第21页/共48页MACS细胞分选策略3、去除分选后再阳性分选： ? 即先去除非目的细胞，再进行阳性分选。 ? ? 适用范围： 》非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。 》要分选非常稀有细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选， 可获得高纯度的目的细胞。 MD0044.02第22页/共48页去除后再阳性分选CD4+CD25+双阳性细胞1. 去除非CD4+ T 细胞。 用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标记非CD4+ T 细胞磁性分选去除标记细胞 先行流出为 CD4+ T 细胞2. CD25微珠直接磁性标记CD25+细胞阳性分选靶细