分子生物学重组和转座讲课文档.pptVIP

第一页，共33页。 现在一页，总共三十三页。 没有遗传重组就没有进化 第二页，共33页。 现在二页，总共三十三页。 没有遗传重组就没有进化 第三页，共33页。 现在三页，总共三十三页。 重组 同源重组 (homologous recombination )或普遍性重组（generalized recombination ） 真核生物中发生在减数分裂期 位点特异性重组(site-specific recombination) 转座重组：转座子 模板选择（copy choice） RNA病毒 第四页，共33页。 现在四页，总共三十三页。 重组 同源重组 (homologous recombination )或普遍性重组（generalized recombination ） 真核生物中发生在减数分裂期 位点特异性重组(site-specific recombination) 转座重组：转座子 模板选择（copy choice） RNA病毒 第五页，共33页。 现在五页，总共三十三页。 同源重组 第六页，共33页。 现在六页，总共三十三页。 Holliday模型 分支端化 （branch migration） 第七页，共33页。 现在七页，总共三十三页。 Holliday模型的疑问 Holliday模型能够较好解释同源重组现象，但也存在问题。 该模型认为进行重组的两个DNA分子在开始时需要在对应链相同位置上发生断裂。DNA分子单链断裂是经常发生的事，但如何保证两个分子能在同一位置发生断裂？ 第八页，共33页。 现在八页，总共三十三页。 同源重组的RecBCD途径 Chi位点(5’-GCTGGGTGG-3’)是目前发现的主要的重组热点。E.coli平均每5000bp就有一个Chi位点，含有大约1000个Chi位点，亦即每五个基因就有一个Chi位点，这些Chi位点中很多在细菌的接合和转导过程中作为重组热点而刺激同源重组的发生。 第九页，共33页。 现在九页，总共三十三页。 位点特异性重组 位点特异性重组是在专一酶的作用下，在DNA特异性序列之间进行重组。 此过程往往发生在一个特定的短的（20-200bp）DNA序列内（重组位点）。 噬菌体溶原途径的整合、抗体基因的重排等都是位点特异性重组。 第十页，共33页。 现在十页，总共三十三页。 位点特异性重组与同源重组的区别 位点特异性重组 同源重组 位点 同源短序列 同源大片段 酶、蛋白 专一的酶 RecA 断裂 特异位点 随机 第十一页，共33页。 现在十一页，总共三十三页。 重组位点的特性 每个重组位点由一对对称排列的重组酶识别序列构成，识别序列中间是一个短的不对称序列，称为交换区（crossover region ），DNA 的断裂和重新连接就发生在交换区。 第十二页，共33页。 现在十二页，总共三十三页。 λ噬菌体DNA的整合与切除 最早研究清楚的位点特异性重组是λ噬菌体DNA在宿主染色体上的整合与切除。 λ噬菌体DNA进入宿主大肠杆菌细胞后存在溶源和裂解两条途径，二者的最初过程是相同的，都要求早期基因的表达，为溶源和裂解途径的歧化做好准备。 两种生活周期的选择取决于C I和Cro蛋白相互拮抗的结果。C I蛋白抑制除自身外所有噬菌体基因的转录，如果C I蛋白占优势，溶源状态就得到建立和维持。Cro蛋白抑制C I基因的转录，它占优势噬菌体即进入繁殖周期，并导致宿主细胞裂解。 第十三页，共33页。 现在十三页，总共三十三页。 第十四页，共33页。 现在十四页，总共三十三页。 λ噬菌体的整合 λ噬菌体DNA编码的λ整合酶(λintegrase,Int)能指导噬菌体DNA插入E.coli染色体DNA中。 λ整合酶在λ噬菌体与宿主的两个特定位点之间催化重组的进行，这两个特异重组位点称为附着位点(att)。 噬菌体的附着位点att P 长度240bp，以POP’表示；细菌相应的附着位点att B 只有23bp，以BOB’表示。二者含有共同的核心序列15bp（O区）。 第十五页，共33页。 现在十五页，总共三十三页。 第十六页，共33页。 现在十六页，总共三十三页。 第十七页，共33页。 现在十七页，总共三十三页。 转座重组 有一种异常的重组类型，是一段DNA 序列插入到另一段DNA 序列中，而不依赖于序列同源性。 这种使某些元件从一个位置向其他位置的移动方式是转座(transposition)。这段可以发生转座的DNA元件，称为转座子(transposon ) 转座中涉及的机制依赖于DNA 链的切割和重接，因此与重组过程联系起来。 转座重组会破坏染色体上基因的排列顺序。 第十八页，共33页。 现在十八页，总共三十三页。