酶的结构纯化及活性十一.pptxVIP

1;3. 酶的活性部位;4. 活性中心外的必需基团（调控部位）;;五、酶活性部位的特点;4. 活性部位具有柔性 活性部位具有柔性，易在底物诱导下发生构象变化，与底物形成互补结构 5. 活性部位通常是一个裂缝 裂缝为底物提供疏水的微环境，利于反应进行;第7页/共49页;第三节 酶作用的专一性;一种酶仅作用于一种或一类化合物，或一定的化学键，催化一定的化学反应并生成一定的产物。酶的这种选择性称为酶的特异性或专一性。;一、 结构特异性 1. 键特异性 对底物分子中其所作用的键要求严格，而不管键两端所连基团的性质 2. 基团特异性 要求底物具有特定的化学键，而且对键的一端所连基团也有一定要求 3. 绝对特异性 酶对作用的底物要求相当严格，甚至只能催化一种底物进行化学反应 ;绝对特异性;相对特异性;酶仅作用于立体异构体中的一种。;立体异构的生理意义： 维持新陈代谢的有序性和稳定性 举例：利用酶促反应可生产特定构型的单一立体异构体药物。;六、酶原和酶原的激活;酶原激活的机理:;赖;;第19页/共49页;第20页/共49页;酶原激活的意义;六、同工酶（isoenzyme）;（二）特点： 1、都是寡聚酶 2、不同的亚基组成 3、不同亚基的活性中心非常相似 4、组织分布部位不同 5、所催化的反应有侧重点;如：;第25页/共49页;第26页/共49页;生理及临床意义 在代谢调节上起着重要的作用； 用于解释发育过程中特有的代谢特征； 同工酶谱的改变有助于对疾病的诊断； 可以作为遗传标志，用于遗传分析研究。;第四节 酶的分离纯化与活力测定;一.酶的分离纯化;选材：材料中酶含量要高且易于处理，然后对材料破碎，离心并收集目标酶。 粗制分离：用盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂分级分离法等对目标酶进行粗分离 精制分离：用柱层析法、梯度离心等对粗酶进一步纯化 酶制剂的脱盐、浓缩、干燥和保存 用透析法、超滤法、凝胶过滤法来脱盐； 用沉淀法、吸收法、超滤法等除去水分，称浓缩； 用冷冻真空干燥法对酶做处理，便于运输；酶需低温保存 ;3、酶分离纯化时的注意事项;二、酶活力的测定;1、酶活力??定 酶活力测定就是测定一定量的酶，在单位时间内产物(P)的生成量或底物（S）的消耗量。 即测定时确定三种量：①加入一定量的酶；②一定时间间隔；③物质的增减量。; 具体物质量的测定，常用的方法有： 光谱分析法：酶将产物转变为（直接或间接）一个可用分光光度法或荧光光度法测出的化合物。 化学法：利用化学反应使产物变成一个可用某种物理方法测出的化合物，然后再反过来算出酶的活性。 放射性化学法：用同位素标记的底物，经酶作用后生成含放射性的产物，在一定时间内，生成的放射性产物量与酶活性成正比。 ; 测酶活所用的反应条件应该是最适条件，所谓最适条件包括最适温度、最适pH、足够大的底物浓度、适宜的离子强度、适当稀释的酶液及严格的反应时间，抑制剂不可有，辅助因子不可缺。 ; 1）酶活力单位的标准化规定 在最佳条件或某一固定条件下，每分钟催化1μmol底物转化为产物所需要的酶量为一个酶活力单位。;3）酶的比活力 酶的比活力是每单位（一般是mg）蛋白质中的酶活力单位数（如：酶单位/mg蛋白）。 对同一种酶来讲，比活力愈高则表示酶的纯度越高（含杂质越少），所以比活力是评价酶纯度高低的一个指标。 ;第五节 酶工程;酶工程;化学酶工程;酶的化学修饰： 用人工方法将酶分子与一些小分子化学基团或具有生物相容性的大分子进行共价修饰，从而改变酶的性质，创造出天然酶没有的优良性能。;酶的固定化： 通过吸附、共价结合、包埋及交联等方式束缚于某种支持物上发挥酶的作用。;生物酶工程;改造酶分子的方法： 1. 通过化学修饰的方式来改变酶的结构； 2. 通过遗传修饰的方式，利用分子生物学技术改造酶分子的基因，进一步改造酶的结构和功能。;第六节 核酶、抗体酶;1、核酶：具有催化能力的核糖核酸。;核酶发现的意义;2、抗体酶：具有催化能力的免疫球蛋白，又称催化性抗体;感谢您的观看！