生产菌种的培养和保藏.pptxVIP

会计学;第一节 生产菌种的培养;种子扩大培养 是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。;一、种子的准则;二、种子制备工艺;实验室种子制备阶段： 琼脂斜面 固体培养基扩大培养 摇瓶液体培养;对接种物的一般要求：;一) 实验室种子制备; 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可以用摇瓶液体培养法。孢子接入含液体培养基的摇瓶中，恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。 如：用灰色链霉菌生产链霉素 用卡那链霉菌生产卡那霉素; 对于不产孢子的细菌，生产上一般采用将试管斜面菌种接入茄瓶斜面或摇瓶培养 如：谷氨酸棒杆菌生产谷氨酸;1、孢子的制备;2）霉菌孢子的制备 霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。 培养的温度一般为25-28?C。 培养时间一般为4-14天。;3）放线菌孢子的制备 放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。 培养温度一般为28?C。 培养时间为5-14天。;二）生产种子制备; 对于生长快的细菌，种子用量比例小，故种子罐相应也少。 如：谷氨酸生产中，采用茄瓶斜面或摇瓶种子接入种子罐于32℃培养7～10h，菌体浓度达108～109个/ml，即可接入发酵罐作为种子。 这称为一级种子罐扩大培养，也称二级发酵。; 生长较慢的菌种，如青霉素生产菌种，其孢子悬浮液接入一级种子罐扩大培养于27℃培养40h，此时孢子发芽，长出短菌丝，再移至含有新鲜培养基的第二级种子罐，于27℃培养10～24h，菌丝迅速繁殖，获粗壮菌体，即可移至发酵罐作为种子。 这称为二级种子罐扩大培养，也称三级发酵。 一般50m3发酵罐都采用三级发酵; 生长更慢的菌种，链霉素生产菌种灰色链霉菌，一般采用三级种子罐扩大培养（四级发酵）; 种子罐的级数越少，越有利于简化工艺和控制，并可减少由于多次移种而带来的染菌的机会。; 虽然种子罐级数随产物的品种及生产规模而定，但也与??选用工艺条件有关。 如改变种子罐的培养条件，加速了孢子发芽及菌体的繁殖，也可相应地减少种子罐的级数。;第二节 种子质量的控制;1）原材料质量;2）水质的影响;2、培养条件;3、培养时间和冷藏时间;4、接种量;二、影响种子质量的因素及控制;营养成分适合种子培养的需要 选择有利于孢子发芽和菌体生长的培养基； 营养上要易于被菌体直接吸收和利用； 营养成分要适当丰富和完全，氮源和维生素含量要高 营养成分要尽可能与发酵培养基相近。;（1）温度 （2）通气量 有足够的通气量可以提高种子质量。 例如，青霉素的生产菌种在制备过程中将通气充足和不足两种情况下得到的种子分别接入发酵罐内，它们的发酵单位可相差1倍。但也有例外，例如土霉素生产菌，一级种子罐的通气量小对发酵有利。;3、种龄; 过于年轻的种子接入发酵罐后，往往会出现前期生长缓慢、发酵周期延长、产物开始形成的时间推迟，造成异常发酵的情况。; 不同品种或同一品种的工艺条件不同，其菌龄也不一样，一般要经过多次试验，考察其发酵罐中产量的多少来确定最适种龄。;4、接种量; 采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌体繁殖到达高峰的时间，使产物的形成提前到来; 但如果接种量过大，往往使菌体生长过快、培养液黏度增加，造成溶氧不足，从而影响产物的合成。 如由嗜碱芽孢杆菌生产碱性蛋白酶的发酵，1%接种量产酶活最高，在0.5～4%之间虽有差别，但影响不大；如超过4%则酶产量明显下降。;三、种子质量的控制措施;第35页/共56页;第36页/共56页;第37页/共56页;第38页/共56页;第39页/共56页; 从种子罐到发酵罐的接种，是通过接种管道，在压力作用下进行的。;四、种子质量的标准;通常测定的参数有：;五、种子异常的分析;第三节 菌种保藏与复壮;一、菌种保藏原理;二、保藏方法;第47页/共56页;三、国内外重要菌种保藏机构;5、普通微生物菌种保藏管理中心 （CCGMC ） 中科院微生物所，北京 6、工业微生物菌种保藏管理中心 (CICC) 轻工部食品发酵工业科学研究所，北京;不同菌种保藏方法比较;四、菌种的复壮（rejuvenation）;措施：;　　;3、菌种保藏与复壮（次重点） 理解：菌种保藏原理；主要保藏方法。 应用：对不同菌种选择适宜的保藏方法及复壮方法。;思考题